طريقة كوخ في علم الأحياء الدقيقة لعزل الثقافات النقية. طرق زراعة وزراعة البكتيريا. طرق عزل الثقافات النقية للهوائيات

يتم استخدام طريقة كوخ لتحديد العدد الإجمالي للبكتيريا. يُسكب 1 مل من مادة الاختبار من التخفيف المناسب في طبق بيتري معقم فارغ ويُسكب 10 - 15 مل من المادة المذابة والمبردة إلى 45 درجة مئوية ميجاباسكال، ويخلط مع السائل، ويدور الطبق على سطح الطاولة.

بعد زراعة المحاصيل، يتم حساب المستعمرات المزروعة على السطح وفي عمق الآجار. للقيام بذلك، يتم وضع الكأس رأسًا على عقب على خلفية سوداء، ويتم تمييز كل مستعمرة معدودة بعلامة على الزجاج. تم تقييم فقط تلك اللوحات التي نمت عليها 30 إلى 300 مستعمرة. إذا نمت أكثر من 300 مستعمرة على طبق، ولا يمكن تكرار التحليل، فيمكن عد المستعمرات تحت إضاءة جانبية قوية باستخدام عدسة مكبرة ولوحة خاصة بشبكة.

يتم إحصاء عدد المستعمرات بما لا يقل عن 20 مربعاً بمساحة 1 سم2 في أماكن مختلفة من اللوحة. يتم حساب متوسط ​​عدد المستعمرات لكل 1 سم2 وضربه في مساحة الطبق.

عند عد المستعمرات، يمكن استخدام جهاز خاص لعد البكتيريا، PSB.

نتيجة عد المستعمرات في كل طبق هو عدد البكتيريا لكل 1 مل (سم3) أو 1 جرام من مادة الاختبار مع مراعاة التخفيف. يتم أخذ العدد النهائي للبكتيريا باعتباره الوسط الحسابي لنتائج عد المستعمرات على الأطباق الملقحة بتخفيفين متجاورين.

مثال:التخفيف 10 -1 - 250 مستعمرة، التخفيف 10 -2 - 23 مستعمرة.

إجمالي عدد البكتيريا = 250 × 10 + 23 × 100/2 = 2400 وحدة مستعمرة/مل = 2.4 × 10 2 وحدة تشكيل مستعمرة/مل (وحدات تشكيل مستعمرة لكل مل).

يمكن تقريب نتيجة البحث إلى 2-3 أرقام معنوية.

طريقة المعايرة.

يستخدم لتحديد عدد SPM.

المرحلة الأولى:تجانس المادة. إذا لزم الأمر، قم بإعداد تعليق لنقل الكائنات الحية الدقيقة إلى الطور السائل.

المرحلة الثانية:تحضير سلسلة من التخفيفات.

المرحلة الثالثة:زرع كميات مختارة من مادة الاختبار (100، 10، 1 مل) وتخفيفاتها بمقدار 1 مل في وسط مغذي سائل. ولزيادة دقة الطريقة، يمكن تلقيح كل حجم بالتوازي في عدة أجزاء من الوسط المغذي (بذر ثنائي، ثلاثة، خمسة صفوف). الأمثل هو التكرار ثلاثة أضعاف (موثوقية كافية بتكلفة منخفضة نسبيًا).

المرحلة الرابعة:مع الأخذ بعين الاعتبار وجود النمو على وسط مغذٍ سائل والبذر من أحجام موجبة على وسط مغذٍ صلب.

المرحلة الخامسة:تحديد الكائنات الحية الدقيقة التي تنمو على وسط غذائي صلب. في هذه الحالة، تؤخذ الخصائص الثقافية في الاعتبار، وإذا لزم الأمر، يتم إجراء دراسات إضافية (دراسة الخصائص الصبغية والمورفولوجية والكيميائية الحيوية والمصلية).

إذا تم استخدام طريقة الصف الواحد، كقاعدة عامة، يتم التعبير عن النتيجة في شكل عيار للكائن الحي الدقيق المطلوب، والذي يعتبر أصغر حجم (أعلى تخفيف) تم اكتشافه فيه.

إذا تم استخدام طريقة متعددة الصفوف، فسيتم تسجيل النتائج باستخدام جداول خاصة تتيح تحديد العيار أو الفهرس (TNI) بناءً على مجموعة الأحجام الإيجابية التي أعطت النمو.

ج. خلق الظروف المواتية لعمل الخلايا الطبيعي

د) نمت المستعمرات سلبية اللاكتوز في قطاعات وسط الإندو.

د. انخفاض حساسية الخلايا المعتمدة على الأنسولين للأنسولين تحت تأثير الجلايكورتيكويدات

على عكس عد الخلايا تحت المجهر، تسمح هذه الطريقة

من الصعب تحديد عدد الخلايا القابلة للحياة فقط في مجتمع ما. نظرًا لعدم وجود وسائط مناسبة بشكل متساوٍ لنمو الكائنات الحية الدقيقة المختلفة، فإن طريقة البذر تجعل من الممكن تحديد عدد خلايا الكائنات الحية الدقيقة القادرة على النمو على وسط يحتوي على تركيبة معينة، ولكنها لا تسمح بمراعاة تلك الكائنات الحية الدقيقة التي لا تنمو أو تنمو ببطء شديد.

تُستخدم هذه الطريقة على نطاق واسع لتحديد عدد الخلايا القابلة للحياة في مختلف الركائز الطبيعية وفي الوسائط المغذية المختبرية. يكمن جوهرها في زرع كمية معينة من معلق الاختبار للكائنات الحية الدقيقة على وسط صلب في أطباق بيتري وحساب المستعمرات المزروعة بعد الحضانة. من المقبول عمومًا أن كل مستعمرة هي نسل خلية واحدة.

يتضمن العمل بهذه الطريقة ثلاث مراحل: تحضير التخفيفات، والتلقيح على وسط صلب في أطباق بيتري، وإحصاء المستعمرات المزروعة.

تحضير التخفيفات. عادة ما يكون عدد الكائنات الحية الدقيقة كبيرًا جدًا، لذا للحصول على مستعمرات معزولة، من الضروري إعداد سلسلة من التخفيفات المتسلسلة. يتم تحضير التخفيفات في ماء الصنبور أو محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.85٪ باستخدام عامل تخفيف ثابت، غالبًا ما يساوي 10. أثناء التجربة، يُنصح باستخدام نفس عامل التخفيف، لأن هذا يقلل من احتمالية الخطأ. لتحضير التخفيفات، يُسكب 9 مل من ماء الصنبور المعقم في أنابيب اختبار جافة معقمة. ثم يتم نقل 1 مل من معلق الاختبار باستخدام ماصة معقمة إلى أنبوب اختبار به 9 مل من الماء المعقم - وهذا هو التخفيف الأول، 10-1. يتم خلط التخفيف الناتج جيدًا باستخدام ماصة معقمة جديدة، وسحب المعلق الناتج إلى الماصة وتحريره منها. يتم تنفيذ هذا الإجراء 3-5 مرات، ثم يتم أخذ 1 مل من المعلق الناتج بنفس الماصة ونقله إلى أنبوب الاختبار الثاني - يتم الحصول على التخفيف الثاني، 10 -2. يتم تحضير التخفيفات اللاحقة بنفس الطريقة. تعتمد درجة التخفيف على كثافة التجمعات الميكروبية التي تتم دراستها؛ وبناء على ذلك، كلما زادت الكثافة السكانية، كلما زادت.

تأكد من استخدام ماصة جديدة لكل تخفيف. إهمال هذه القاعدة يؤدي إلى نتيجة خاطئة.

بذر. يمكن زرع التعليق إما سطحيًا أو عميقًا.

قبل البذر باستخدام الطريقة السطحية (الشكل 16) ، يُسكب وسط المغذيات المنصهر ، وغالبًا ما يكون مشبعًا ، في صف من أطباق بتري المعقمة ، 15-20 مل لكل منها. تترك الأكواب على سطح أفقي حتى يتماسك الوسط. يوصى بتجفيف سطح وسط الأجار قبل الزراعة لإزالة ماء التكثيف. لهذا الغرض، يتم فتح أطباق بيتري ويتم وضع الوسط المجمد لأسفل لمدة 20-30 دقيقة في خزانة تجفيف يتم تسخينها إلى 70-80 درجة مئوية. ويجب تعقيم الخزانة أولاً.

الشكل 16. مخطط تحضير التخفيفات وغربلة معلقات الكائنات الحية الدقيقة باستخدام ملعقة.

يمكن تجفيف وسط الأجار بوضع الأكواب في منظم الحرارة لمدة 2-3 أيام مع إبقاء الأغطية لأسفل. بعد أن يصبح الوسط جاهزًا، يتم تطبيق حجم مُقاس بدقة (0.05 أو 0.1 مل) من التخفيف المناسب على سطحه باستخدام ماصة معقمة ويتم توزيعه على سطح الوسط باستخدام ملعقة زجاجية معقمة. يتم إجراء البذر على وسط كثيف، كقاعدة عامة، من التخفيفات الثلاثة الأخيرة، ويتم إجراء 2-4 عمليات زرع متوازية من كل منها. يمكن إجراء التلقيح باستخدام ماصة واحدة، ولكن يجب عليك بالتأكيد البدء بتخفيف أكبر. لكل تخفيف، استخدم ملعقة معقمة جديدة. بعد البذر، توضع أطباق بيتري في منظم الحرارة مع غلق الأغطية.

عند البذر العميق (الشكل 17)، تتم إضافة حجم تم قياسه بدقة (عادة 0.1 أو 0.5 أو 1 مل) من المعلق أو التخفيف إلى وسط الأجار المذاب والمبرد إلى 48-50 درجة، ويتم خلطه جيدًا ثم يُسكب على الفور في وعاء كوب بيتري. يُسمح للوسط بالتصلب. وفي حالة البذر العميق، عادة ما يتم استخدام الوسط المسكوب في أنابيب الاختبار. بالنسبة للعمل واسع النطاق، لا يتم صب الوسيط في أنابيب الاختبار، ولكن يتم ذلك على النحو التالي. بواسطة

الشكل 17. مخطط تحضير التخفيفات وتطعيم معلقات الكائنات الحية الدقيقة باستخدام الطريقة العميقة

يتم نقل 1 مل من التخفيف المناسب باستخدام ماصة معقمة إلى 2-4 أطباق بتري معقمة. ثم املأ الأكواب بـ 15-20 مل من الوسط المذاب والمبرد إلى 48-50 درجة مئوية وامزج الوسط المغذي مع اللقاح جيدًا مع حركة دورانية طفيفة للكوب على سطح الطاولة، وبعد ذلك تُترك الأكواب على سطح الطاولة. سطح أفقي حتى يصلب. عندما يتصلب الوسط، توضع أطباق بيتري في منظم الحرارة.

لتحديد عدد خلايا الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية، يتم وضع أطباق بتري ذات وسط كثيف في الكائنات اللاهوائية بعد التلقيح.

عد المستعمرات المزروعة. عادة ما يتم حساب مستعمرات البكتيريا بعد 3، ومستعمرات الفطريات والخميرة - بعد 5-7، ومستعمرات الشعيات - بعد 7-15 يومًا من الحضانة في منظم الحرارة.

يتم إجراء العد عادةً دون فتح أطباق بيتري. للراحة، ضع علامة على المستعمرة المحسوبة بنقطة على الجزء الخارجي من أسفل الكوب باستخدام الحبر أو قلم الرصاص على الزجاج. إذا كان هناك عدد كبير من المستعمرات، يتم تقسيم الجزء السفلي من طبق بيتري إلى قطاعات، ويتم حساب عدد المستعمرات في كل قطاع، ويتم تلخيص النتائج. هناك عدادات خاصة لحساب المستعمرات (الشكل 18). ولعد المستعمرات، يوضع طبق بيتري مع وضع الغطاء لأسفل على طاولة معقمة (1)، مضاءة من الأسفل، ويتم عد المستعمرات باستخدام قلم ذو طرف زنبركي (2). يلامس طرف القلم الجزء السفلي من الكأس في المنطقة المقابلة لموضع المستعمرات، ويضغط على القلم. ونتيجة لذلك تبقى علامة على الزجاج ويرتفع الحامل ويغلق الدائرة وتزداد قراءات العداد بمقدار واحد. ثم يتم رفع سن القلم فوق الزجاج، ويعيده الزنبرك إلى موضعه الأصلي، وتنفتح الدائرة.

الشكل 18 . عداد لحساب عدد مستعمرات الكائنات الحية الدقيقة

يجب اعتبار أفضل تخفيف هو الذي ينمو منه 30-50 إلى 100-150 مستعمرة عند زرعه على طبق أجار في طبق بتري. إذا كان عدد المستعمرات المزروعة أقل من 10، فلن يتم استخدام هذه النتائج لحساب عدد الخلايا في المادة الأولية. يتم تلخيص نتائج البذر الموازي من نفس التخفيف ويتم تحديد متوسط ​​عدد المستعمرات المزروعة عند البذر من تخفيف معين على لوحة واحدة.

يتم حساب عدد الخلايا في 1 مل من ركيزة الاختبار بواسطة

الصيغة: م = أ 10 ن ,

أين م- عدد الخلايا في 1 مل، أ- متوسط ​​عدد المستعمرات عند زرع تخفيف معين، عامل التخفيف 10، ص- الرقم التسلسلي للتخفيف الذي تم إجراء البذر منه، الخامس- حجم المعلق المأخوذ للتلقيح بالملل.

مقدمة لممارسة أصباغ الأنيلين

استخدام نظام الغمر والمكثف في الفحص المجهري

تطوير طريقة للزراعة على السوائل البيولوجية والوسط الغذائي الصلب

تطوير طريقة البذر الجزئي

اكتشاف العامل المسبب لمرض الجمرة الخبيثة والكوليرا والسل والسل

في نفس السنوات تقريبًا، تم تشكيل المدرسة الألمانية لعلماء الأحياء المجهرية، برئاسة روبرت كوخ (1843 - 1910)، وعملت بنجاح. بدأ كوخ بحثه في وقت كان فيه دور الكائنات الحية الدقيقة في مسببات الأمراض المعدية موضع تساؤل جدي. لإثبات ذلك، كانت هناك حاجة إلى معايير واضحة، والتي صاغها كوخ ودخلت التاريخ تحت اسم "ثالوث هنلي-كوخ". وكان جوهر الثالوث على النحو التالي:

1) يجب دائمًا اكتشاف العامل الممرض الميكروبي المشتبه به فقط في مرض معين، وعدم عزله عن أمراض أخرى أو عن أفراد أصحاء؛

2) يجب عزل الميكروب الممرض في مزرعة نقية؛

3) يجب أن تؤدي المزرعة النقية لهذا الميكروب إلى إحداث مرض في حيوانات التجارب المصابة بصورة سريرية ومرضية مشابهة للمرض الذي يصيب الإنسان.

لقد أظهرت الممارسة أن النقاط الثلاث ذات أهمية نسبية، لأنه ليس من الممكن دائمًا عزل العامل المسبب للمرض في ثقافة نقية وإحداث مرض مميز للإنسان في حيوانات التجارب. بالإضافة إلى ذلك، تم العثور على مسببات الأمراض لدى الأشخاص الأصحاء، وخاصة بعد المرض. ومع ذلك، في المراحل الأولى من تطور وتكوين علم الأحياء الدقيقة الطبية، عندما تم عزل العديد من الكائنات الحية الدقيقة التي لا علاقة لها بالمرض من جسم المرضى، لعب الثالوث دورًا مهمًا في تحديد العامل المسبب الحقيقي للمرض. وبناء على فكرته، أثبت كوخ أخيرا أن الكائنات الحية الدقيقة التي تم اكتشافها سابقا في الحيوانات المصابة بالجمرة الخبيثة تلبي متطلبات الثالوث وهي العامل المسبب الحقيقي لهذا المرض. وعلى طول الطريق، أثبت كوخ قدرة بكتيريا الجمرة الخبيثة على تكوين الجراثيم.

لعب كوخ دورًا كبيرًا في تطوير الطرق الأساسية لدراسة الكائنات الحية الدقيقة. وهكذا، فقد أدخل في الممارسة الميكروبيولوجية طريقة عزل الثقافات البكتيرية النقية على الوسائط المغذية الصلبة، وكان أول من استخدم أصباغ الأنيلين لصبغ الخلايا الميكروبية واستخدم العدسات الغاطسة والتصوير المجهري لدراستها المجهرية.

في عام 1882، أثبت كوخ أن الكائنات الحية الدقيقة التي عزلها كانت العامل المسبب لمرض السل، والذي سمي فيما بعد بعصية كوخ. في عام 1883، عزل كوخ وزملاؤه العامل المسبب للكوليرا - ضمة الكوليرا (ضمة كوخ).

منذ عام 1886، كرّس كوخ بحثه بالكامل للبحث عن أدوية فعالة في علاج مرض السل أو الوقاية منه. خلال هذه الدراسات، حصل على أول دواء مضاد للسل - السل، وهو مستخلص من مزرعة بكتيريا السل. على الرغم من أن السلين ليس له أي تأثير علاجي، إلا أنه يستخدم بنجاح لتشخيص مرض السل.

حظي العمل العلمي لكوخ باعتراف عالمي، وفي عام 1905 حصل على جائزة نوبل في الطب.

باستخدام الأساليب التي طورها كوخ، اكتشف علماء البكتيريا الفرنسيون والألمان العديد من البكتيريا، واللولبيات، والأوالي - العوامل المسببة للأمراض المعدية في البشر والحيوانات. من بينها مسببات الأمراض للعدوى القيحية والجروح: المكورات العنقودية، العقديات، كلوستريديا العدوى اللاهوائية، الإشريكية القولونية ومسببات الأمراض المعوية (بكتيريا التيفوئيد ونظيرة التيفية، بكتيريا الزحار شيجا)، العامل المسبب لعدوى الدم - اللولبية الانتكاسية الحمى ومسببات أمراض الجهاز التنفسي والعديد من الالتهابات الأخرى، بما في ذلك تلك التي تسببها الأوليات (الملاريا البلازمودية، الأميبا الزحارية، الليشمانيا). وتسمى هذه الفترة "العصر الذهبي" لعلم الأحياء الدقيقة.

دور العلماء المحليين في تطوير العلوم الميكروبيولوجية (I.I. Mechnikov، D.I. Ivanovsky، G.N. Gabrichevsky، S.N. Vinogradsky، V.D. Timakov، N.F Gamaleya، L.A. Zilber، P.F Zdrodovsky، Z.V Ermolyeva).

كان أحد مؤسسي علم المناعة هو I. I. ميتشنيكوف (1845-1916)، مبتكر نظرية المناعة البلعمية أو الخلوية. في عام 1888، قبل متشنيكوف دعوة باستير وترأس المختبر في معهده. ومع ذلك، لم يقطع متشنوف العلاقات الوثيقة مع وطنه. زار روسيا عدة مرات، وعمل العديد من الأطباء الروس في مختبره بباريس. من بينهم Y.Yu.Bardakh، V.A.Barykin، A.M.Bezredka، M.V.Weinberg، G.N.Gabrichevsky، V.I.Isaev، N.N.Klodnitsky، I.G.Savchenko، L.A. Tarasevich، V.A. Khavkin، Ts.V. Tsiklinskaya، F.Ya Chistovich وآخرون، الذي قدم مساهمة كبيرة في تطوير علم الأحياء الدقيقة والمناعة وعلم الأمراض المحلي والعالمي.

على الرغم من التقدم الكبير في مجال إنشاء مناعة مضادة للعدوى، لم يكن هناك شيء معروف عن آليات تطورها. كانت نقطة التحول هي اكتشاف I.I. متشنيكوف (1845-1916)، صنعه في ميسينا عام 1882 أثناء دراسة رد فعل يرقة نجم البحر على إدخال شوكة الورد فيها. لقد كانت تلك المناسبة السعيدة عندما وقعت ملاحظة صدفة في ذهن مستعد وقادت آي. متشنيكوف لإنشاء عقيدة البلعمة والالتهابات والمناعة الخلوية.

في عام 1892، نشر متشنيكوف عمله "محاضرات عن علم الأمراض المقارن للالتهاب"، حيث قام، باعتباره مفكرًا بارزًا، بفحص العمليات المرضية من وجهة نظر النظرية التطورية. وفي عام 1901 ظهر كتابه الجديد “المناعة ضد الأمراض المعدية” والذي لخص نتائج سنوات عديدة من الأبحاث في مجال المناعة.

إن النقاش الذي دار بين متشنيكوف ومؤيديه مع أتباع النظرية الخلطية، الذين رأوا عمل الأجسام المضادة كأساس للمناعة، اكتسب أهمية إبداعية كبيرة. بدأت دراسة الأجسام المضادة بعمل P. Ehrlich، ثم J. Bordet، الذي تم إجراؤه في العقد الأخير من القرن التاسع عشر.

إن مساهمة بول إيرليك (1854-1915) في تطوير علم المناعة، وكذلك في تكوين وتطوير العلاج الكيميائي، لا تقدر بثمن. كان هذا العالم أول من صاغ مفهومي المناعة الإيجابية والسلبية وكان مؤلف نظرية شاملة للمناعة الخلطية، والتي أوضحت كلاً من أصل الأجسام المضادة وتفاعلها مع المستضدات. إن توقع إيرليك بوجود مستقبلات خلوية تتفاعل بشكل خاص مع مجموعات معينة من المستضدات قد تعرض لانتقادات مدمرة لسنوات عديدة. ومع ذلك، فقد تم إحياؤه في النصف الثاني من القرن العشرين في نظرية بيرنت، وعلى المستوى الجزيئي حظي باعتراف عالمي.

I. I. كان متشنيكوف من أوائل الذين فهموا أن النظريات الخلطية والبلعمية للمناعة لا تستبعد بعضها البعض، ولكنها تكمل بعضها البعض فقط. في عام 1908، حصل ميتشنيكوف وإيرليخ على جائزة نوبل بشكل مشترك لعملهما في مجال علم المناعة.

اكتشافات إيرليك:

1. استخدام أزرق الميثيلين في علاج الملاريا

2. استخدام التريبان الأحمر لعلاج داء المثقبيات

3. اكتشاف السلفارسان (1907)

4. تطوير طريقة لتحديد نشاط الأمصال المضادة ودراسة تفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات

5. نظرية المناعة الخلطية.

نهاية القرن التاسع عشر تميزت باكتشاف عصر جديد لمملكة فيرا. كان الممثل الأول لهذه المملكة هو فيروس فسيفساء التبغ، الذي يصيب أوراق التبغ، والذي اكتشف في 12 فبراير 1892 من قبل دي إيفانوفسكي، وهو موظف في قسم علم النبات بجامعة سانت بطرسبرغ، والثاني هو مرض الحمى القلاعية الفيروس الذي يسبب المرض الذي يحمل نفس الاسم في الحيوانات الأليفة، اكتشف في عام 1898 من قبل F. Leffler وP.Frosch. ومع ذلك، لم يكن من الممكن تقدير هذه الاكتشافات في ذلك الوقت، وظلت بالكاد ملحوظة على خلفية النجاحات الرائعة في علم البكتيريا.

كان رئيس مدرسة موسكو البكتريولوجية وأحد قادة علماء البكتيريا الروس هو جي إن غابريشيفسكي (1860-1907)، الذي ترأس في عام 1895 المعهد البكتريولوجي في جامعة موسكو، الذي افتتح بأموال خاصة. عمل في مجال العلاج النوعي والوقاية من الحمى القرمزية والحمى الراجعة. حظيت نظريته حول المكورات العقدية عن أصل الحمى القرمزية بقبول عالمي في نهاية المطاف. غابريشيفسكي هو مؤلف "دليل علم البكتيريا السريرية للأطباء والطلاب" (1893) والكتاب المدرسي "علم البكتيريا الطبية"، الذي صدر في أربع طبعات. ج.ن. قدم جابريشيفسكي (1860-1907) العلاج المصلي في روسيا ودرس آليات المناعة ضد الحمى الراجعة والدفتيريا والحمى القرمزية.

كان المركز الرئيسي لمدرسة بيريربورج البكتريولوجية هو معهد الطب التجريبي. تم تعيين S.N.VINOGRADSKY، الذي أصبح مشهورًا عالميًا لعمله في مجال علم الأحياء الدقيقة العام، رئيسًا لقسم البكتيريا. باستخدام طريقة المحاصيل الاختيارية التي طورها. اكتشف فينوغرادسكي بكتيريا الكبريت والحديد، والبكتيريا الآزوتية - العوامل المسببة لعملية النترجة في التربة. أسس دور الكائنات الحية الدقيقة في الزراعة.

د. تيماكوف (1905-1977) هو أحد مؤسسي عقيدة الميكوبلازما وأشكال L من البكتيريا، ودرس وراثة الكائنات الحية الدقيقة والبلعمة الجرثومية والوقاية من الأمراض المعدية.

في عام 1934 د. تمت دعوة تيماكوف إلى معهد تورمين لعلم الأحياء الدقيقة والأوبئة، حيث ترأس قسم إنتاج اللقاحات والأمصال. وكان معدل الإصابة بالالتهابات المعوية لا يزال مرتفعا في الجمهورية في ذلك الوقت. د. يدافع تيماكوف عن أطروحته للدكتوراه حول الأدوية الوقائية ضد الالتهابات المعوية. ويجري العالم الشاب أيضًا دراساته الأولى حول العاثيات والفيروسات القابلة للتصفية في تركمانستان.

تحت قيادة ف.د. بدأ تيماكوف في إنشاء قسم جديد لعلم الأحياء الدقيقة الطبية - دراسة الأشكال L من البكتيريا والميكوبلازما. كان هذا الاتجاه استمرارًا منطقيًا لدراسة أشكال التصفية، والتي منها V.D. بدأ تيماكوف نشاطه العلمي. من أجل سلسلة من الدراسات لتوضيح دور الأشكال L من البكتيريا وعائلة الميكوبلازما في الأمراض المعدية، قام V.D. تيماكوف مع البروفيسور ج. حصل كاجان على جائزة لينين عام 1974.
أحد الاتجاهات الرئيسية للنشاط العلمي لـ V.D. تيماكوفا مكرسة لعلم وراثة الكائنات الحية الدقيقة. د. اعتبر تيماكوف أنه من الضروري استخدام التحليل الجيني لحل المشكلات الميكروبيولوجية والوبائية ذات الأهمية الطبية. وفي الوقت الحاضر، فإن اتجاه العمل على وراثة البكتيريا هو الاتجاه الرئيسي في معهد علم الأوبئة والأحياء الدقيقة الذي سمي باسمه. الجمالية. أنشطة ف.د. لم تقتصر جهود تيماكوفا لإعادة بناء علم الوراثة على إجراء أبحاثها الخاصة. لقد فعل الكثير لإعادة إنشاء علم الوراثة في جميع أنحاء بلدنا.
بالإضافة إلى العاطفة لعمله، تميز فلاديمير دميترييفيتش بعقل واضح وفهم للحياة والشجاعة. وقد تجلت الميزة الأخيرة بشكل كامل في معركته ضد الاكتشافات "العظيمة" المناهضة للعلم، مثل تلك التي ادعت أن الفيروسات يمكن أن تتحول إلى بكتيريا.

قام عالم الأحياء الدقيقة الروسي البارز إن إف جماليا (1859-1949)، الذي عمل في عام 1886 مع باستير في مجال داء الكلب، مع ميتشنيكوف وبارداخ، بتأسيس أول محطة بكتريولوجية في روسيا، حيث تم إنتاج لقاح مضاد لداء الكلب وتم تطعيم الناس ضد داء الكلب. إن إف جماليا هو مؤلف العديد من الأعمال العلمية المخصصة لداء الكلب والكوليرا ومشاكل أخرى في علم الأحياء الدقيقة والمناعة.

L. A. ZILBER (1894-1966) هو مؤسس النظرية الفيروسية لأصل الأورام، وقد عزل العامل المسبب لالتهاب الدماغ الذي ينقله القراد في الشرق الأقصى.

ألهم التقدم في دراسة مستضدات الورم إل إيه زيلبر بمحاولة التطعيم ضد الأورام، والذي بدأه حوالي عام 1950. بالتعاون مع Z.L. Baidakova وR.M. Radzikhovskaya على نموذجين: ورم براون بيرس في الأرانب وسرطان الثدي التلقائي في الفئران.

بي.اف. تعامل زدرودوفسكي (1890-1976) مع مشكلة أمراض الريكتسيا والملاريا وداء البروسيلات وتنظيم المناعة.

Zinaida Vissarionovna ERMOLYEVA هي مبتكر أول مضاد حيوي محلي. من بين كل إنجازات التقدم العلمي والتكنولوجي، لا شك أن اكتشاف المضادات الحيوية، وفي المقام الأول البنسلين، له أهمية قصوى للحفاظ على صحة الناس وزيادة متوسط ​​العمر المتوقع لهم. من بين العلماء البارزين في بلدنا الذين ساهموا بشكل كبير في تطوير هذا المجال من الطب، ينتمي أحد الأماكن الرائدة بحق إلى مبتكر أول مضاد حيوي محلي، وهو عالم ميكروبيولوجي متميز، ومنظم رعاية صحية موهوب، وجمهور مشهور شخصية، مدرس رائع، أكاديمي في أكاديمية العلوم الطبية في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية، عالم مشرف في جمهورية روسيا الاتحادية الاشتراكية السوفياتية، الحائز على جائزة الدولة لاتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية زينايدا فيساريونوفنا إرموليفا. جنبًا إلى جنب مع علماء آخرين، وقفت على أصول الكيمياء البكتيرية الطبية ودراسة المضادات الحيوية في بلدنا، وكانت شخصًا يتمتع بموهبة تنظيمية كبيرة وطاقة لا تنضب، وقد أكسبها عملها الدؤوب وصفاتها الشخصية الاستثنائية احترامها وتقديرها العالميين.

إحدى المجالات المهمة للنشاط العلمي لزينايدا فيساريونوفنا هي دراسة مرض الكوليرا. بناءً على دراسات متعمقة وشاملة لتشكل وبيولوجيا الكوليرا والضمات الشبيهة بالكوليرا، اقترحت Z. V. Ermolyeva طريقة جديدة للتشخيص التفريقي لهذه الكائنات الحية الدقيقة.

في عام 1942، نُشرت دراسة Z. V. Ermolyeva بعنوان "الكوليرا"، والتي لخصت نتائج ما يقرب من 20 عامًا من دراسة ضمة الكوليرا. قدمت هذه الدراسة طرقًا جديدة للتشخيص المختبري والعلاج والوقاية من الكوليرا.
كرست Zinaida Vissarionovna جزءًا كبيرًا من عملها العلمي لعزل ودراسة المواد التي لها تأثير مضاد للبكتيريا. تم عزل أول مادة من هذا النوع، تسمى "الليزوزيم"، بواسطة Z. V. Ermolyeva مع I. S. Buyanovskaya في عام 1929. كما أظهرت نتائج المزيد من الأبحاث، تم العثور على الليزوزيم في العديد من الأنسجة، سواء من أصل حيواني أو نباتي.

في عام 1960، تلقت مجموعة من العلماء برئاسة Z. V. Ermolyeva، لأول مرة في بلدنا، عقار مضاد للفيروسات مضاد للفيروسات. تم استخدام هذا الدواء لأول مرة لعلاج الأنفلونزا الشديدة في عام 1962 وكعلاج وقائي. يستخدم الدواء حاليا للوقاية من الأنفلونزا وغيرها من الالتهابات الفيروسية التنفسية الحادة، وكذلك لعلاج عدد من الأمراض الفيروسية في ممارسة العين والجلد.

كرست زينايدا فيساريونوفنا أكثر من 30 عامًا من حياتها (1942-1974) لدراسة المضادات الحيوية.

اسم Z. V. يرتبط Ermolyeva ارتباطًا وثيقًا بإنشاء أول بنسلين محلي، وتطوير علم المضادات الحيوية، واستخدامها على نطاق واسع في بلدنا. تطلب العدد الكبير من الجرحى في الفترة الأولى من الحرب الوطنية العظمى تطويرًا مكثفًا وإدخالًا فوريًا في الممارسة الطبية لأدوية فعالة للغاية لمكافحة عدوى الجروح. في هذا الوقت (1942) وجدت Z. V. Ermolyeva وزملاؤها في معهد عموم الاتحاد لعلم الأوبئة والأحياء الدقيقة منتجًا نشطًا للبنسلين وعزلوا أول بنسلين محلي - كروستوسين. بالفعل في عام 1943، بدأ المختبر في إعداد البنسلين للتجارب السريرية.

في وقت لاحق، تحت قيادة Z. V. Ermolyeva، تم إنشاء العديد من المضادات الحيوية الجديدة وأشكال جرعاتها وإدخالها في الإنتاج، بما في ذلك إيمولين، إيكمونوفوسيلين، بيسيلين، ستربتومايسين، التتراسيكلين؛ مستحضرات المضادات الحيوية المركبة (ديباسفين، إريسيكلين، إلخ). يجب التأكيد على أن Zinaida Vissarionovna شاركت دائمًا بنشاط في تنظيم الإنتاج الصناعي للمضادات الحيوية في بلدنا.

حصل الطبيب والعالم الألماني روبرت كوخ (1843-1910) على جائزة نوبل لعمله الميكروبيولوجي ضد مرض السل. كما ابتكر العديد من الأساليب الأساسية للأبحاث الميكروبيولوجية، والتي لا يزال بعضها مستخدمًا حتى اليوم.

عمل مدى الحياة

في نهاية القرن التاسع عشر، قتل مرض السل ما يقرب من ثلث جميع البالغين في منتصف العمر في أوروبا. قام الأطباء والعلماء في ذلك الوقت بمحاولات عديدة لإيجاد علاج. ولم يكن كوخ روبرت استثناءً؛ فقد أصبحت مكافحة هذا المرض الخطير مهمته وعمله طوال حياته. وعلى الرغم من التقدم الهائل في تحديد هذا المرض وعلاجه المحتمل، وحتى حصوله على جائزة نوبل في الطب لهذا العمل، إلا أن العالم لم يتوقف أبدًا عن تحسين أساليب البحث التي كان لها تأثير كبير على علم الأحياء الدقيقة بأكمله.

الشباب واختيار المهنة

كان والدا عالم المستقبل من عمال المناجم الفقراء الذين اندهشوا مما أعطاهم إياه مصير الصبي القدير. ولد هاينريش هيرمان روبرت كوخ عام 1843 في كلاوستال (ألمانيا)، وكان طفلاً معجزة حقًا عندما كان طفلاً. في سن الخامسة، كان يقرأ الصحف بالفعل، وبعد ذلك بقليل أصبح مهتمًا بالأدب الكلاسيكي وكان خبيرًا في الشطرنج. بدأ اهتمامي بالعلوم في المدرسة الثانوية، حيث اخترت علم الأحياء كمادتي المفضلة.

في عام 1866، عندما كان عمره 23 عامًا، حصل هاينريش روبرت كوخ على درجة الدكتوراه في الطب وأمضى العقد التالي في العمل كطبيب في العديد من المستشفيات والجمعيات العلمية الحكومية. وفي عام 1876، نشر بحثه الرئيسي عن مرض الجمرة الخبيثة، مما أكسبه شهرة واسعة النطاق. وبعد سنوات قليلة، تم تعيينه مستشارًا لمكتب الصحة، حيث أمضى معظم وقته في التعامل مع المشكلات المتعلقة بمرض السل.

تحديد سبب مرض السل

يعرف الطب الحديث العديد من أسباب معظم الأمراض. في الأوقات التي عاش فيها كوخ روبرت، لم تكن هذه المعرفة شائعة جدًا. وكان من أولى الاكتشافات المهمة التي توصل إليها العالم هو التعرف على بكتيريا المتفطرة السلية، التي تسبب هذا المرض القاتل. أثناء دراسة أسباب العدوى، قام روبرت كوخ بإصابة خنازير غينيا عمدا بمواد من واحد من ثلاثة حيوانات مصابة: القرود والماشية والبشر. ونتيجة لذلك، تبين أن بكتيريا الخنازير المصابة مطابقة لتلك التي أصيبت بها، بغض النظر عن مصدر العدوى.

مسلمات كوخ

ما هي المساهمات التي قدمها روبرت كوخ في علم الأحياء الدقيقة؟ كانت إحدى الطرق الأكثر تأثيرًا هي الاقتراح القائل بأنه يمكن تحديد العامل المسبب للمرض بدرجة عالية من الثقة إذا تم استيفاء أربعة شروط، وهو ما أصبح يُعرف فيما بعد باسم مسلمات كوخ. ها هم:

1. يجب أن تسبب الكائنات الحية الدقيقة المرض في جميع الكائنات الحية التي تتواجد فيها بكثرة، وبالتالي لا ينبغي أن تكون موجودة في الكائنات الحية غير المصابة.
2. ويجب عزل الميكروب المشتبه فيه وزراعته في شكله النقي.
3. ومن المفترض أن تؤدي إعادة إدخال الميكروب إلى الإصابة بالمرض في كائنات لم تكن مصابة سابقًا.
4. يجب إعادة عزل الميكروب المشتبه به من كائن الاختبار، وتنميته في شكل نقي، ويكون مطابقًا للميكروب المعزول في الأصل.

مؤسس علم البكتيريا والأحياء الدقيقة

ومن بين الأمراض التي درسها الطبيب الألماني روبرت كوخ (الجمرة الخبيثة عام 1876 والسل عام 1882)، كانت هناك أيضًا الكوليرا عام 1883. في عام 1905، حصل العالم على جائزة نوبل في علم وظائف الأعضاء أو الطب. بينما كان هاينريش هيرمان روبرت كوخ لا يزال طالبًا في الطب، كان لديه اهتمام كبير بعلم الأمراض والأمراض المعدية. كطبيب، عمل في العديد من البلدات الصغيرة في جميع أنحاء ألمانيا، وخلال الحرب الفرنسية البروسية (1870-1872) تطوع للجبهة كجراح عسكري.

تم تعيينه لاحقًا كعامل طبي محلي، وكانت مسؤوليته الرئيسية هي دراسة انتشار الأمراض البكتيرية المعدية. لا يزال تطبيق التكنولوجيا الحيوية في الطب يعتمد بشكل كبير على مبادئ كوخ لتوثيق أسباب الأمراض المعدية. توفي العالم الكبير عام 1910 في منطقة الغابة السوداء (ألمانيا) عن عمر يناهز 66 عامًا.

أبحاث الجمرة الخبيثة

في الوقت الذي عاش فيه روبرت كوخ، كانت الجمرة الخبيثة منتشرة على نطاق واسع بين حيوانات المزرعة في منطقة فولشتاين. لم يكن لدى العالم أي معدات علمية في تلك اللحظة، ولم يكن من الممكن الوصول إلى المكتبات والاتصالات مع العلماء الآخرين. لكن هذا لم يمنعه، وبدأ بدراسة هذا المرض. كان مختبره عبارة عن شقة مكونة من 4 غرف، وكان منزله، وكانت معداته الرئيسية عبارة عن مجهر هدية من زوجته.

تم اكتشاف عصيات Pollender وRayer وDavaine سابقًا على أنها العوامل المسببة للجمرة الخبيثة، وشرع كوخ في إثبات علميًا أن هذه العصية كانت في الواقع سبب المرض. وقام بتطعيم الفئران باستخدام رقائق الخشب محلية الصنع بعصيات الجمرة الخبيثة المأخوذة من طحال حيوانات المزرعة التي ماتت بسبب المرض. تم اكتشاف أن وفاة القوارض حدثت على وجه التحديد نتيجة دخول العدوى إلى دم الحيوانات. وأكدت هذه الحقيقة النتائج التي توصل إليها علماء آخرون زعموا أن المرض يمكن أن ينتقل عن طريق دماء الحيوانات المصابة بالجمرة الخبيثة.

عصيات الجمرة الخبيثة مقاومة للبيئة الخارجية

لكن هذا لم يرضي كوخ. كما أراد أن يعرف ما إذا كانت هذه الميكروبات يمكن أن تسبب المرض إذا لم تكن على اتصال بأي نوع من الكائنات الحيوانية. ولحل هذه المشكلة، حصل على مزارع نقية من العصيات. توصل روبرت كوخ، من خلال دراسته وتصويره، إلى استنتاج مفاده أنه في ظل ظروف غير مواتية، ينتجون جراثيم يمكنها تحمل نقص الأكسجين والعوامل الأخرى السلبية للبكتيريا. وبالتالي، يمكنهم البقاء على قيد الحياة في البيئة الخارجية لفترة طويلة، وعندما يتم تهيئة الظروف المناسبة، يتم استعادة حيويتهم، وتخرج عصيات من الجراثيم، قادرة على إصابة الكائنات الحية التي تدخل إليها، على الرغم من حقيقة أنها كانت موجودة سابقًا لا يوجد اتصال معهم.

روبرت كوخ: الاكتشافات والإنجازات

وقد عرض كوخ نتائج عمله المضني على الجمرة الخبيثة على فرديناند كوهن، أستاذ علم النبات في جامعة بريسلاو، الذي جمع زملائه ليشهدوا الاكتشاف. وكان من بين الحاضرين أيضًا أستاذ علم الأمراض التشريحية في كونيهايم. لقد تأثر الجميع بشدة بعمل كوخ، وبعد نشر بحث حول هذا الموضوع في مجلة نباتية عام 1876، أصبح كوخ مشهورًا على الفور. ومع ذلك، استمر في العمل لدى فولشتاين لمدة أربع سنوات أخرى، وخلال هذه الفترة قام بتحسين أساليبه في تسجيل البكتيريا وتلطيخها وتصويرها.

الحياة في برلين

في وقت لاحق، بالفعل في برلين، واصل تحسين الأساليب البكتريولوجية، وكذلك اختراع طرق جديدة - زراعة البكتيريا النقية في الوسائط الصلبة، مثل البطاطس. المجال الذي واصل روبرت كوخ العمل فيه، علم الأحياء الدقيقة، ظل تخصصه الضيق حتى وقت قريب. كما طور أيضًا طرقًا جديدة لصبغ البكتيريا مما جعلها أكثر وضوحًا وساعد في التعرف عليها. وكانت نتيجة كل هذا العمل إدخال طرق يمكن من خلالها الحصول على البكتيريا المسببة للأمراض ببساطة وسهولة في مزرعة نقية، خالية من الكائنات الحية الأخرى، ويمكن من خلالها اكتشافها وتحديد هويتها. وبعد عامين من وصوله إلى برلين، اكتشف كوخ عصية السل، بالإضافة إلى طريقة لزراعتها في شكلها النقي.

مكافحة الكوليرا

كان كوخ لا يزال مشغولاً بالعمل ضد مرض السل عندما تم إرساله إلى مصر في عام 1883 كرئيس للجنة الألمانية للتحقيق في تفشي وباء الكوليرا في ذلك البلد. وهنا اكتشف الضمة التي تسبب المرض، وجلب الثقافات النقية إلى ألمانيا. كما تعامل مع قضية مماثلة في الهند. واستنادًا إلى معرفته ببيولوجيا ضمة الكوليرا وطريقة انتشارها، صاغ العلماء قواعد لمكافحة الوباء، والتي وافقت عليها القوى العظمى في دريسدن عام 1893 وشكلت الأساس لطرق المكافحة التي لا تزال تستخدم حتى اليوم.

التعيين في المناصب العليا

في عام 1885، تم تعيين روبرت كوخ، الذي تنحدر سيرته الذاتية من بلدة صغيرة وأسرة فقيرة، أستاذًا للنظافة في جامعة برلين. وفي عام 1890 تم تعيينه جراحًا عامًا، وفي عام 1891 أصبح أستاذًا فخريًا لكلية الطب ومديرًا للمعهد الجديد للأمراض المعدية. خلال هذه الفترة، عاد كوخ إلى عمله في مكافحة مرض السل. لقد حاول إيقاف المرض باستخدام عقار أطلق عليه اسم السل، وهو مصنوع من المتفطرات. تم إنشاء نسختين من الدواء. تسبب أولها على الفور في جدل كبير. لسوء الحظ، كانت القوة العلاجية لهذا الدواء مبالغ فيها إلى حد كبير، ولم تكن الآمال المعلقة عليه مبررة. أعلن كوخ عن السل الجديد (الإصدار الثاني) في عام 1896 وكانت قيمته الطبية أيضًا مخيبة للآمال، لكنه مع ذلك أدى إلى اكتشاف مواد ذات قيمة تشخيصية.

ومن ثم الطاعون والملاريا وداء المثقبيات...

في عام 1896، سافر كوخ إلى جنوب أفريقيا لدراسة أصول الطاعون البقري. وعلى الرغم من عدم إمكانية معرفة سبب هذا المرض، إلا أنه لا يزال يتم احتواء تفشي المرض. وأعقب ذلك العمل في الهند وأفريقيا في مجال مكافحة الملاريا، وحمى المياه السوداء، وداء المثقبيات، والطاعون البقري. وكان نشر ملاحظاته حول هذه الأمراض في عام 1898. وبعد وقت قصير من عودته إلى ألمانيا، استمرت رحلاته حول العالم. هذه المرة كانت إيطاليا، حيث أكد عمل السير رونالد روس في مجال الملاريا وقام بعمل مفيد في مسببات أشكال مختلفة من الملاريا ومكافحتها باستخدام الكينين.

المساهمة في علم الأحياء الدقيقة: الجوائز الفخرية والميداليات

خلال هذه السنوات الأخيرة من حياته، توصل كوخ إلى استنتاج مفاده أن العصيات التي تسبب مرض السل لدى البشر والماشية ليست متطابقة. وقد أثار تصريحه في المؤتمر الطبي الدولي لمكافحة السل في لندن عام 1901 الكثير من الجدل، ولكن من المعروف الآن أن وجهة نظر كوخ كانت صحيحة. أدى عمله على التيفوس إلى فكرة أن المرض ينتقل من شخص لآخر أكثر بكثير من انتقاله من مياه الشرب، مما أدى إلى تدابير مراقبة جديدة.

في ديسمبر 1904، تم إرسال كوخ إلى شرق أفريقيا لدراسة حمى الماشية، حيث قدم ملاحظات مهمة ليس فقط عن المرض، ولكن أيضًا عن أنواع البابيزيا والمثقبيات المسببة للأمراض وداء اللولبيات المنقولة بالقراد. حصل البروفيسور روبرت كوخ على العديد من الجوائز والأوسمة، والعضوية الفخرية في الجمعيات والأكاديميات العلمية في برلين وفيينا ونابولي ونيويورك وغيرها. حصل على وسام التاج الألماني، والصليب الأكبر من وسام النسر الأحمر الألماني. في عدد من البلدان، أقيمت النصب التذكارية والمعالم الأثرية تكريما لعالم الأحياء الدقيقة العظيم. توفي الدكتور كوخ في 27 مايو 1910 في بادن بادن.

أنتجت ألمانيا العديد من العقول العلمية المبتكرة على مر القرون، وكان أحد أعظم العلماء في عصره هو روبرت هاينريش هيرمان كوخ، الذي وضع الأساس لدراسة علم الجراثيم وساعد في شرح الأسباب والعلاجات الممكنة لمختلف الأمراض البكتيرية.

لقد كان باحثًا شجاعًا حيث كان مسؤولاً عن بذل جهود غير مسبوقة لدراسة الأمراض التي تهدد الحياة مثل الجمرة الخبيثة والسل وغيرها الكثير. لعب هذا العالم واسع النطاق أيضًا دورًا مهمًا في إنشاء المختبرات الحديثة. لم يكن روبرت كوخ مجرد عالم موهوب، بل كان عبقريًا، وعدد الجوائز والميداليات التي حصل عليها طوال حياته هو أفضل دليل على المساهمة التي قدمها في العلوم الطبية العالمية.

بيئات خاصة.

في علم الجراثيم، تُستخدم الوسائط المغذية الجافة المنتجة صناعيًا على نطاق واسع، وهي عبارة عن مساحيق استرطابية تحتوي على جميع مكونات الوسط باستثناء الماء. لإعدادها، يتم استخدام هضم التريبتيك من المنتجات غير الغذائية الرخيصة (نفايات الأسماك واللحوم ووجبة العظام، الكازين التقني). فهي ملائمة للنقل، ويمكن تخزينها لفترة طويلة، وتريح المختبرات من العملية الهائلة لإعداد الوسائط، وتقربها من حل مشكلة توحيد الوسائط. تنتج الصناعة الطبية الوسائط الجافة Endo و Levin و Ploskirev وأجار كبريتيت البزموت وأجار المغذيات والكربوهيدرات مع مؤشر BP وغيرها.

منظمات الحرارة

تستخدم منظمات الحرارة لزراعة الكائنات الحية الدقيقة.

منظم الحرارة هو جهاز يحافظ على درجة حرارة ثابتة. يتكون الجهاز من سخان وغرفة وجدران مزدوجة يدور بينها الهواء أو الماء. يتم تنظيم درجة الحرارة بواسطة منظم الحرارة. درجة الحرارة المثلى لتكاثر معظم الكائنات الحية الدقيقة هي 37 درجة مئوية.

الدرس 7

الموضوع: طرق عزل الثقافة البحتة للهوائيات. خطوات عزل الثقافة النقية للبكتيريا الهوائية بطريقة التفكك الميكانيكي

خطة الدرس

1. مفهوم "الثقافة النقية" للبكتيريا

2. طرق عزل الزراعات النقية بالفصل الميكانيكي

3. الطرق البيولوجية لعزل الزراعات النقية

4. طرق التعرف على البكتيريا

الغرض من الدرس:تعريف الطلاب بطرق مختلفة لعزل الزراعات النقية وتعليم كيفية الزرع بالحلقة والضربات والحقن

المبادئ التوجيهية للمظاهرة

في بيئتها الطبيعية، توجد البكتيريا في الجمعيات. من أجل تحديد خصائص الميكروبات ودورها في تطور العملية المرضية، من الضروري وجود البكتيريا في شكل مجموعات متجانسة (الثقافات النقية). الثقافة النقية عبارة عن مجموعة من الأفراد البكتيرية من نفس النوع المزروعة على وسط غذائي.

طرق عزل المزارع النقية للبكتيريا الهوائية

طريقة باستور طريقة كوخ الفيزيائية البيولوجية

(له تاريخي (لوحة الأسلاك)

معنى)

الطريقة الكيميائية

شتشوكيفيتش

حديث

البذر بالحلقة البذر بالملعقة

(طريقة دريجالسكي)

طرق عزل الثقافات النقية:

1. تعتمد طرق الفصل الميكانيكية على فصل الميكروبات عن طريق الفرك المتسلسل لمادة الاختبار على سطح الأجار.

أ) طريقة باستور - لها أهمية تاريخية، وتنص على التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار في وسط مغذي سائل بواسطة طريقة التدحرج

ب) تعتمد طريقة كوخ - طريقة اللوحة - على التخفيف المتسلسل لمادة الاختبار باستخدام أجار ببتون اللحم، يليه صب أنابيب الاختبار التي تحتوي على المادة المخففة في أطباق بتري.

ج) طريقة Drigalsky - عند زرع مادة غنية بالنباتات الدقيقة، استخدم 2-3 أكواب للبذر المتسلسل باستخدام ملعقة.

د) البذر بحلقة في ضربات متوازية.

2. تعتمد الطرق البيولوجية على الخصائص البيولوجية لمسببات الأمراض.

أ) البيولوجية - عدوى الحيوانات شديدة الحساسية، حيث تتكاثر الميكروبات وتتراكم بسرعة. في بعض الحالات، تكون هذه الطريقة هي الوحيدة التي تسمح بعزل مزرعة العامل الممرض من شخص مريض (على سبيل المثال، المصاب بمرض التوليميا)، وفي حالات أخرى تكون أكثر حساسية (على سبيل المثال، عزل المكورات الرئوية في الفئران البيضاء أو العامل الممرض السل في خنازير غينيا).

ب) الكيميائية - على أساس مقاومة حمض المتفطرات. لتحرير المادة من النباتات المصاحبة لها
تعامل مع محلول حمض. فقط عصيات السل هي التي ستنمو، لأن الميكروبات المقاومة للحمض تموت تحت تأثير الحمض.

ج) تعتمد الطريقة الفيزيائية على مقاومة الجراثيم للحرارة. لعزل ثقافة البكتيريا المكونة للبوغ من
المخاليط، يتم تسخين المادة عند 80 درجة مئوية وتلقيحها في وسط غذائي. لن تنمو إلا البكتيريا البوغية، لأن أبواغها ظلت حية وأدت إلى النمو.

د) طريقة شتشوكيفيتش - القائمة على الحركة العالية لنبات Proteus vulgaris، القادرة على إنتاج نمو زاحف.

طريقة تحضير طبق الاجار

يتم إذابة MPA في حمام مائي، ثم يتم تبريده إلى 50-55 درجة مئوية. يتم حرق عنق الزجاجة في لهب مصباح الكحول، ويتم فتح أطباق بيتري بحيث تناسب عنق الزجاجة دون لمس حواف الطبق، ويسكب 10-15 مل من MPA، ويوضع الغطاء مغلقا، يتم رج الطبق بحيث يتم توزيع الوسط بالتساوي، ويترك على سطح أفقي حتى يتصلب. بعد التجفيف، يتم تخزين لوحات أجار لوحة في البرد.

حلقة البذر

باستخدام حلقة معقمة مبردة، خذ قطرة من المادة، وافتح إحدى حواف الكوب بيدك اليسرى، وأدخل الحلقة إلى الداخل وقم ببعض الضربات في مكان واحد باستخدام حلقة على الحافة المقابلة، ثم قم بتمزيق الحلقة وقم بالتطعيم يتم رسم المادة بضربات متوازية من حافة الكأس إلى الأخرى بفاصل 5-6 مم. في بداية البذر، عندما يكون هناك الكثير من الميكروبات في الحلقة، فإنها ستعطي نموًا متموجًا، ولكن مع كل ضربة يكون هناك عدد أقل وأقل من الميكروبات في الحلقة، وستظل منفردة وتنتج مستعمرات معزولة.

البذر وفقا لطريقة Drigalsky

تستخدم هذه الطريقة عند تلقيح المواد الملوثة بشدة بالبكتيريا (القيح، البراز، البلغم). للزرع باستخدام طريقة Drigalsky، خذ ملعقة وعدة أكواب (3-4). الملعقة هي أداة مصنوعة من سلك معدني أو سهم زجاجي، مثنية على شكل مثلث أو على شكل حرف L. يتم إدخال المادة في الكوب الأول بحلقة أو ماصة ويتم توزيعها بالتساوي باستخدام ملعقة على سطح الوسط، وبنفس الملعقة، دون حرقها، يتم فرك المادة في الوسط المغذي في الكوب الثاني، ثم في المجموعة الثالثة. مع مثل هذا البذر، سيكون للكوب الأول نمو متكدس، وسوف تنمو المستعمرات المعزولة في الأكواب اللاحقة.