Metoda Koch izolimi mikrobiologjik i kulturave të pastra. Metodat për mbjelljen dhe kultivimin e baktereve. Metodat për izolimin e kulturave të pastra të aerobeve

Metoda Koch përdoret për të përcaktuar numrin e përgjithshëm të baktereve. 1 ml të materialit të provës nga hollimi i duhur derdhet në një enë Petri të zbrazët sterile dhe 10 - 15 ml i shkrirë dhe i ftohur në 45 0 C MPA hidhet, përzihet me lëngun, duke e rrotulluar enën në sipërfaqen e tryezës.

Pas kultivimit të kulturave, numërohen kolonitë e rritura në sipërfaqe dhe në thellësi të agarit. Për ta bërë këtë, kupa vendoset me kokë poshtë në një sfond të zi, secila koloni e numëruar shënohet me një shënues në gotë. Vetëm ato pllaka në të cilat u rritën 30 deri në 300 koloni u vlerësuan. Nëse më shumë se 300 koloni janë rritur në një pjatë dhe analiza nuk mund të përsëritet, atëherë kolonitë mund të numërohen nën ndriçim të fortë anësor duke përdorur një xham zmadhues dhe një pjatë të veçantë me një rrjet.

Numri i kolonive llogaritet në të paktën 20 katrorë me sipërfaqe 1 cm 2 në vende të ndryshme në pjatë. Numri mesatar i kolonive për 1 cm2 llogaritet dhe shumëzohet me sipërfaqen e pjatës.

Gjatë numërimit të kolonive, mund të përdoret një pajisje speciale për numërimin e baktereve, PSB.

Rezultati i numërimit të kolonive në çdo pjatë është numri i baktereve për 1 ml (cm 3) ose 1 g të materialit testues, duke marrë parasysh hollimin. Numri përfundimtar i baktereve merret si mesatarja aritmetike e rezultateve të numërimit të kolonive në pllaka të inokuluara me dy hollime ngjitur.

Shembull: hollimi 10 -1 - 250 koloni, hollimi 10 -2 - 23 koloni.

Numri total i baktereve = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu/ml = 2,4 x 10 2 cfu/ml (njësi formuese koloni për ml).

Rezultati i hulumtimit mund të rrumbullakoset në 2 - 3 shifra të rëndësishme.

Metoda e titrimit.

Përdoret për të përcaktuar numrin e SPM.

Faza 1: homogjenizimi i materialit. Nëse është e nevojshme, përgatitni një suspension për transferimin e mikroorganizmave në fazën e lëngshme.

Faza e dytë: duke përgatitur një sërë hollimesh.

Faza e 3-të: mbjellja e vëllimeve të zgjedhura të materialit testues (100, 10, 1 ml) dhe hollimet e tij prej 1 ml në një mjedis të lëngshëm ushqyes. Për të rritur saktësinë e metodës, çdo vëllim mund të inokulohet paralelisht në disa pjesë të mjedisit ushqyes (mbjellje me dy, tre, pesë rreshta). Optimale është një përsëritje e trefishtë (besueshmëri e mjaftueshme me një kosto relativisht të ulët).

Faza e 4: duke marrë parasysh praninë e rritjes në një mjedis ushqyes të lëngshëm dhe mbjelljen nga vëllime pozitive në një mjedis të ngurtë ushqyes.

Faza e 5-të: identifikimi i mikroorganizmave të rritur në një mjedis të ngurtë ushqyes. Në këtë rast merren parasysh vetitë kulturore dhe, nëse është e nevojshme, kryhen studime shtesë (studimi i vetive tintoriale, morfologjike, biokimike dhe serologjike).

Nëse përdoret metoda me një rresht, si rregull, rezultati shprehet në formën e një titri të mikroorganizmit të dëshiruar, i cili merret si vëllimi më i vogël (hollimi më i lartë) në të cilin është zbuluar ende.

Nëse është përdorur një metodë me shumë rreshta, rezultatet regjistrohen duke përdorur tabela të veçanta që bëjnë të mundur përcaktimin e titrit ose indeksit (TNI) bazuar në kombinimin e vëllimeve pozitive që dhanë rritje.

C. krijimi i kushteve të favorshme për funksionimin normal të qelizave

D) Kolonitë laktozë-negative u rritën në sektorë të mediumit Endo.

D. ulje e ndjeshmërisë së qelizave të varura nga insulina ndaj insulinës nën ndikimin e glukokortikoideve

Ndryshe nga numërimi i qelizave nën mikroskop, kjo metodë lejon

Është e vështirë të përcaktohet vetëm numri i qelizave të qëndrueshme në një popullatë. Meqenëse nuk ka media po aq të përshtatshme për rritjen e mikroorganizmave të ndryshëm, metoda e mbjelljes bën të mundur përcaktimin e numrit të qelizave të mikroorganizmave të afta të rriten në një mjedis të një përbërje të caktuar, por nuk lejon marrjen parasysh të atyre mikroorganizmave që nuk rriten ose rriten jashtëzakonisht ngadalë.

Metoda përdoret gjerësisht për të përcaktuar numrin e qelizave të qëndrueshme në substrate të ndryshme natyrore dhe në mjedise ushqyese laboratorike. Thelbi i tij qëndron në mbjelljen e një vëllimi të caktuar të suspensionit testues të mikroorganizmave në një mjedis të ngurtë në enët Petri dhe numërimin e kolonive të rritura pas inkubacionit. Në përgjithësi pranohet se çdo koloni është pasardhës i një qelize.

Puna me këtë metodë përfshin tre faza: përgatitjen e hollimeve, inokulimin në medium të ngurtë në enët Petri dhe numërimin e kolonive të rritura.

Përgatitja e hollimeve. Popullata e mikroorganizmave është zakonisht mjaft e madhe, kështu që për të marrë koloni të izoluara është e nevojshme të përgatiten një sërë hollimesh serike. Hollimet përgatiten në ujë rubineti ose tretësirë ​​0,85% NaCl duke përdorur një faktor hollimi konstant, më së shpeshti i barabartë me 10. Gjatë eksperimentit, këshillohet përdorimi i të njëjtit faktor hollimi, pasi kjo zvogëlon mundësinë e gabimit. Për përgatitjen e hollimeve, 9 ml ujë rubineti steril derdhen në provëza sterile të thata. Pastaj 1 ml e suspensionit të provës transferohet me një pipetë sterile në një provëz me 9 ml ujë steril - ky është hollimi i parë, 10 -1. Hollimi që rezulton përzihet tërësisht me një pipetë të re sterile, duke e tërhequr pezullimin që rezulton në pipetë dhe duke e lëshuar atë prej saj. Kjo procedurë kryhet 3-5 herë, më pas merret 1 ml nga suspensioni që rezulton me të njëjtën pipetë dhe transferohet në epruvetën e dytë - fitohet hollimi i dytë, 10 -2. Hollimet e mëvonshme përgatiten në të njëjtën mënyrë. Shkalla e hollimit varet nga dendësia e popullsisë mikrobike që studiohet; në përputhje me rrethanat, sa më e madhe të jetë dendësia e popullsisë, aq më e madhe është.

Sigurohuni që të përdorni një pipetë të re për çdo hollim. Neglizhimi i këtij rregulli çon në një rezultat të gabuar.

Mbjellja. Pezullimi mund të mbillet ose sipërfaqësor ose i thellë.

Para mbjelljes duke përdorur metodën sipërfaqësore (Fig. 16), lënda ushqyese e shkrirë, më së shpeshti e agarizuar, hidhet në një rresht enësh Petri sterile, nga 15-20 ml secila. Kupat lihen në një sipërfaqe horizontale derisa mediumi të ngurtësohet. Rekomandohet të thahet sipërfaqja e agarit përpara mbjelljes për të hequr ujin e kondensimit. Për këtë qëllim hapen enët Petri dhe mediumi i ngrirë poshtë vendoset për 20-30 minuta në një kabinet tharjeje të ngrohur në 70-80 0 C. Fillimisht kabineti duhet të sterilizohet.

Figura 16. Skema përgatitja e hollimeve dhe sitja e një suspensioni mikroorganizmash me një shpatull.

Mediumi i agarit mund të thahet duke i vendosur gotat në një termostat për 2-3 ditë me kapakët poshtë. Pasi mjedisi të jetë gati, një vëllim i matur saktësisht (0,05 ose 0,1 ml) i hollimit të duhur aplikohet në sipërfaqen e tij me një pipetë sterile dhe shpërndahet mbi sipërfaqen e mediumit me një shpatull qelqi steril. Mbjellja në një mjedis të dendur kryhet, si rregull, nga tre hollimet e fundit, dhe nga secila bëhen 2-4 mbjellje paralele. Inokulimet mund të bëhen me një pipetë, por patjetër duhet të filloni me një hollim më të madh. Për çdo hollim, përdorni një shpatull të re sterile. Pas mbjelljes, enët Petri vendosen në një termostat me kapakë poshtë.

Gjatë mbjelljes së thellë (Fig. 17), një vëllim i matur saktësisht (zakonisht 0,1, 0,5 ose 1 ml) i suspensionit ose hollimit i shtohet mjedisit të agarit të shkrirë dhe të ftohur në 48-50°, përzihet tërësisht dhe më pas derdhet menjëherë në filxhan Petri. Mediumi lihet të ngurtësohet. Në rastin e mbjelljes së thellë, zakonisht përdoret mediumi i derdhur në epruveta. Për punë në shkallë të gjerë, mediumi nuk derdhet në provëza, por bëhet si më poshtë. Nga

Figura 17. Skema për përgatitjen e hollimeve dhe inokulimin e një suspensioni të mikroorganizmave duke përdorur metodën e thellë

1 ml nga hollimi përkatës transferohet me një pipetë sterile në 2-4 enë Petri sterile. Më pas mbushni kupat me 15-20 ml medium të shkrirë dhe të ftohur në 48-50° dhe përzieni tërësisht lëndën ushqyese me inokulumin me një lëvizje të lehtë rrotulluese të filxhanit në sipërfaqen e tavolinës, pas së cilës kupat lihen në sipërfaqe horizontale derisa të ngurtësohet. Kur mediumi ngurtësohet, enët Petri vendosen në një termostat.

Për të përcaktuar numrin e qelizave të mikroorganizmave anaerobe, enët Petri me një mjedis të dendur vendosen në anaerobe pas inokulimit.

Numërimi i kolonive të rritura. Kolonitë e baktereve zakonisht numërohen pas 3, kolonitë e kërpudhave dhe majave - pas 5-7, dhe kolonitë e aktinomiceteve - pas 7-15 ditësh inkubimi në një termostat.

Numërimi zakonisht kryhet pa hapur enët Petri. Për lehtësi, shënoni koloninë e llogaritur me një pikë në pjesën e jashtme të pjesës së poshtme të filxhanit duke përdorur bojë ose laps në gotë. Nëse ka një numër të madh kolonish, pjesa e poshtme e pjatës Petri ndahet në sektorë, numërohet numri i kolonive në secilin sektor dhe përmblidhen rezultatet. Ka numërues të veçantë për numërimin e kolonive (Fig. 18). Për të numëruar kolonitë, një enë Petri vendoset me kapak poshtë në një tavolinë sterile (1), e ndriçuar nga poshtë dhe kolonitë numërohen me një stilolaps me një majë sustë (2). Maja e stilolapsit prek pjesën e poshtme të kupës në zonën që korrespondon me pozicionin e kolonive dhe shtyp stilolapsin. Si rezultat, një shenjë mbetet në xhami, dhe mbajtësi ngrihet lart, duke mbyllur qarkun dhe leximet e njehsorit rriten me një. Pastaj maja e stilolapsit ngrihet mbi xhami, susta e kthen atë në pozicionin e tij origjinal dhe qarku hapet.

Figura 18 . Numërues për numërimin e numrit të kolonive të mikroorganizmave

Hollimi më i mirë duhet konsideruar ai nga i cili, kur mbillet në një pjatë agar në një pjatë Petri, rriten 30-50 deri në 100-150 koloni. Nëse numri i kolonive të rritura është më pak se 10, atëherë këto rezultate nuk përdoren për të llogaritur numrin e qelizave në materialin fillestar. Rezultatet e mbjelljeve paralele nga i njëjti hollim përmblidhen dhe përcaktohet numri mesatar i kolonive të rritura kur mbillen nga një hollim i caktuar në një pjatë.

Numri i qelizave në 1 ml të substratit testues llogaritet nga

formula: M= A 10n ,

Ku M- numri i qelizave në 1 ml, A- numri mesatar i kolonive gjatë mbjelljes së një hollimi të caktuar, faktori 10-hollimi, P- numri serial i hollimit nga i cili është bërë mbjellja, V- vëllimi i suspensionit të marrë për inokulim, në ml.

Hyrje në praktikën e ngjyrave aniline

Përdorimi i sistemit të zhytjes dhe kondensatorit në mikroskop

Zhvillimi i një metode kultivimi në lëngje biologjike dhe lëndë ushqyese të ngurta

Zhvillimi i një metode të nënmbjelljes së pjesshme

Zbulimi i agjentit shkaktar të antraksit, kolerës, tuberkulozit dhe tuberkulinës

Rreth të njëjtave vite u formua dhe funksionoi me sukses shkolla gjermane e mikrobiologëve me në krye ROBERT KOCH (1843 - 1910). Koch filloi kërkimin e tij në një kohë kur roli i mikroorganizmave në etiologjinë e sëmundjeve infektive po vihej në dyshim serioz. Për ta vërtetuar atë, kërkoheshin kritere të qarta, të cilat u formuluan nga Koch dhe hynë në histori me emrin "Triada Henle-Koch". Thelbi i treshes ishte si më poshtë:

1) patogjeni i dyshuar mikrobik duhet të zbulohet gjithmonë vetëm në një sëmundje të caktuar, dhe të mos jetë i izoluar nga sëmundje të tjera ose nga individë të shëndetshëm;

2) mikrobi patogjen duhet të izolohet në kulturë të pastër;

3) një kulturë e pastër e këtij mikrobi duhet të shkaktojë një sëmundje në kafshët e infektuara eksperimentale me një pamje klinike dhe patologjike të ngjashme me sëmundjen e njeriut.

Praktika ka treguar se të tre pikat kanë një rëndësi relative, pasi nuk është gjithmonë e mundur të izolohet agjenti shkaktar i një sëmundjeje në një kulturë të pastër dhe të shkaktohet një sëmundje karakteristike për njerëzit në kafshët eksperimentale. Përveç kësaj, patogjenët janë gjetur te njerëzit e shëndetshëm, veçanërisht pas sëmundjes. Sidoqoftë, në fazat e hershme të zhvillimit dhe formimit të mikrobiologjisë mjekësore, kur shumë mikroorganizma që nuk kishin lidhje me sëmundjen u izoluan nga trupi i pacientëve, treshja luajti një rol të rëndësishëm në identifikimin e agjentit të vërtetë shkaktar të sëmundjes. Bazuar në konceptin e tij, Koch më në fund vërtetoi se mikroorganizmi i zbuluar më parë te kafshët me antraks plotëson kërkesat e treshes dhe është shkaktari i vërtetë i kësaj sëmundjeje. Gjatë rrugës, Koch vendosi aftësinë e baktereve të antraksit për të formuar spore.

Koch luajti një rol të madh në zhvillimin e metodave themelore për studimin e mikroorganizmave. Kështu, ai futi në praktikën mikrobiologjike metodën e izolimit të kulturave të pastra të baktereve në mjedise të ngurta ushqyese, ishte i pari që përdori bojëra aniline për të njollosur qelizat mikrobike dhe përdori thjerrëzat e zhytjes dhe mikrofotografinë për studimin e tyre mikroskopik.

Në 1882, Koch vërtetoi se mikroorganizmi që izoloi ishte shkaktari i tuberkulozit, i cili më vonë u quajt bacil i Koch. Në 1883, Koch dhe kolegët e tij izoluan agjentin shkaktar të kolerës - Vibrio cholerae (vibrio e Koch).

Që nga viti 1886, Koch i ka kushtuar të gjithë kërkimin e tij kërkimit të barnave efektive në trajtimin ose parandalimin e tuberkulozit. Gjatë këtyre studimeve, ai mori ilaçin e parë kundër tuberkulozit - tuberkulin, i cili është një ekstrakt nga një kulturë e baktereve të tuberkulozit. Megjithëse tuberkulina nuk ka efekt terapeutik, përdoret me sukses për të diagnostikuar tuberkulozin.

Puna shkencore e Koch mori njohje mbarëbotërore dhe në vitin 1905 iu dha Çmimi Nobel në Mjekësi.

Duke përdorur metodat e zhvilluara nga Koch, bakteriologët francezë dhe gjermanë zbuluan shumë baktere, spiroketa dhe protozoa - agjentë shkaktarë të sëmundjeve infektive te njerëzit dhe kafshët. Midis tyre janë patogjenët e infeksioneve purulente dhe të plagëve: stafilokokët, streptokokët, klostridia e infeksionit anaerobik, E. coli dhe patogjenët e infeksioneve të zorrëve (bakteret tifoide dhe paratifoide, bakteret e dizenterisë Shiga), agjenti shkaktar i një infeksioni të gjakut - spiroketa e përsëritur. ethe, patogjene të rrugëve të frymëmarrjes dhe shumë infeksione të tjera, duke përfshirë ato të shkaktuara nga protozoarët (plazmodia malaria, dizenteria ameba, leishmania). Kjo periudhë quhet "epoka e artë" e mikrobiologjisë.

Roli i shkencëtarëve vendas në zhvillimin e shkencës mikrobiologjike (I.I. Mechnikov, D.I. Ivanovsky, G.N. Gabrichevsky, S.N. Vinogradsky, V.D. Timakov, N.F. Gamaleya, L.A. Zilber, P.F. Zdrodovsky, Z.V. Ermolyeva).

Një nga themeluesit e imunologjisë ishte I.I.MECHNIKOV (1845-1916), krijuesi i teorisë fagocitare ose qelizore të imunitetit. Në 1888, Mechnikov pranoi ftesën e Pasteur dhe drejtoi laboratorin në institutin e tij. Sidoqoftë, Mechniov nuk i prishi lidhjet e ngushta me atdheun e tij. Ai vizitoi Rusinë disa herë dhe shumë mjekë rusë punuan në laboratorin e tij në Paris. Midis tyre janë Y.Yu.Bardakh, V.A.Barykin, A.M.Bezredka, M.V.Weinberg, G.N.Gabrichevsky, V.I.Isaev, N.N.Klodnitsky, I.G.Savchenko, L.A.Tarasevich, V.A.Khavkins T.V.,h,T. i cili dha një kontribut të rëndësishëm në zhvillimin e mikrobiologjisë, imunologjisë dhe patologjisë vendase dhe botërore.

Megjithë përparimet e rëndësishme në fushën e krijimit të imunitetit anti-infektiv, praktikisht asgjë nuk dihej për mekanizmat e zhvillimit të tij. Pika e kthesës ishte zbulimi i I.I. Mechnikov (1845-1916), i bërë prej tij në Messina në 1882 ndërsa studionte reagimin e një larve ylli deti ndaj futjes së një gjembi trëndafili në të. Ishte ai rasti i lumtur kur një vëzhgim i rastësishëm ra në mendjen e përgatitur dhe e çoi I.I. Mechnikov në krijimin e doktrinës së fagocitozës, inflamacionit dhe imunitetit qelizor.

Në 1892, Mechnikov botoi veprën e tij "Leksione mbi patologjinë krahasuese të inflamacionit", në të cilën, si një mendimtar i shquar, ai shqyrtoi proceset patologjike nga këndvështrimi i teorisë evolucionare. Në vitin 1901 u shfaq libri i tij i ri "Imuniteti ndaj sëmundjeve infektive", i cili përmblodhi rezultatet e shumë viteve të kërkimit në fushën e imunitetit.

Diskutimi që u zhvillua midis Mechnikov dhe mbështetësve të tij me ndjekësit e teorisë humorale, të cilët e shihnin veprimin e antitrupave si bazën e imunitetit, fitoi një rëndësi të madhe krijuese. Studimi i antitrupave filloi me punën e P. Ehrlich, dhe më pas J. Bordet, të kryer në dekadën e fundit të shekullit të 19-të.

Kontributi i PAUL EHRLICH (1854-1915) në zhvillimin e imunologjisë, si dhe në formimin dhe zhvillimin e kimioterapisë, është i paçmuar. Ky shkencëtar ishte i pari që formuloi konceptet e imunitetit aktiv dhe pasiv dhe ishte autori i një teorie gjithëpërfshirëse të imunitetit humoral, i cili shpjegoi si origjinën e antitrupave ashtu edhe ndërveprimin e tyre me antigjenet. Parashikimi i Ehrlich për ekzistencën e receptorëve qelizorë që ndërveprojnë në mënyrë specifike me grupe të caktuara antigjenesh ka qenë subjekt i kritikave shkatërruese për shumë vite. Megjithatë, ajo u ringjall në gjysmën e dytë të shekullit të 20-të në teorinë e Burnet dhe në nivelin molekular mori njohje universale.

I.I. Mechnikov ishte një nga të parët që kuptoi se teoritë humorale dhe fagocitare të imunitetit nuk janë reciprokisht ekskluzive, por vetëm plotësojnë njëra-tjetrën. Në vitin 1908, Mechnikov dhe Ehrlich u nderuan së bashku me Çmimin Nobel për punën e tyre në fushën e imunologjisë.

Zbulimet e Ehrlich:

1. Përdorimi i metilenit blu në trajtimin e malaries

2. Përdorimi i tripanit të kuq për trajtimin e tripanozomës

3. Zbulimi i salvarsanit (1907)

4. Zhvillimi i një metode për përcaktimin e aktivitetit të serumeve antitoksike dhe studimin e ndërveprimit antigjen-antitrupa

5. teoria e imunitetit humoral.

Fundi i shekullit të 19-të u shënua nga zbulimi epokal i mbretërisë së Virës. Përfaqësuesi i parë i kësaj mbretërie ishte virusi i mozaikut të duhanit, i cili infekton gjethet e duhanit, i zbuluar më 12 shkurt 1892 nga D.I. IVANOVSKY, punonjës i Departamentit të Botanikës të Universitetit të Shën Petersburgut, i dyti ishte sëmundja Afta Epizootike. virus, i cili shkakton sëmundjen me të njëjtin emër te kafshët shtëpiake, i zbuluar në 1898 nga F. Leffler dhe P. Frosch. Sidoqoftë, këto zbulime nuk mund të vlerësoheshin në atë kohë dhe mbetën mezi të vërejtura në sfondin e sukseseve të shkëlqyera të bakteriologjisë.

Kreu i shkollës bakteriologjike të Moskës dhe një nga drejtuesit e bakteriologëve rusë ishte G.N. GABRICHEVSKY (1860-1907), i cili në 1895 drejtoi Institutin Bakteriologjik në Universitetin e Moskës, i hapur me fonde private. Ai ka punuar në fushën e trajtimit specifik dhe parandalimit të skarlatinës dhe etheve të përsëritura. Teoria e tij streptokoke e origjinës së etheve të kuqe të ndezur përfundimisht fitoi pranim universal. Gabrichevsky është autor i "Udhëzuesit për bakteriologjinë klinike për mjekë dhe studentë" (1893) dhe librit shkollor "Bakteriologjia mjekësore", i cili kaloi në katër botime. G.N. Gabrichevsky (1860-1907) prezantoi seroterapinë në Rusi dhe studioi mekanizmat e imunitetit ndaj etheve të përsëritura, difterisë dhe skarlatinës.

Qendra kryesore e shkollës bakteriologjike Pererburg ishte Instituti i Mjekësisë Eksperimentale. Shef i departamentit bakteriologjik u emërua S.N.VINOGRADSKY, i cili u bë i famshëm në botë për punën e tij në fushën e mikrobiologjisë së përgjithshme. Ai zhvilloi duke përdorur metodën e kulturave zgjedhore. Winogradsky zbuloi bakteret e squfurit dhe hekurit, bakteret nitrifikuese - agjentët shkaktarë të procesit të nitrifikimit në tokë. Ai themeloi rolin e mikroorganizmave në bujqësi.

V.D. TIMAKOV (1905-1977) është një nga themeluesit e doktrinës së mykoplazmave dhe L-formave të baktereve, ka studiuar gjenetikën e mikroorganizmave, bakteriofagjinë dhe parandalimin e sëmundjeve infektive.

Në vitin 1934 V.D. Timakov ishte i ftuar në Institutin e Mikrobiologjisë dhe Epidemiologjisë Turmen, ku drejtoi departamentin për prodhimin e vaksinave dhe serumeve. Incidenca e infeksioneve të zorrëve ishte ende e lartë në republikë në atë kohë. V.D. Timakov po mbron tezën e doktoraturës për barnat parandaluese kundër infeksioneve të zorrëve. Shkencëtari i ri po kryen gjithashtu studimet e tij të para mbi bakteriofagët dhe viruset e filtrueshme në Turkmenistan.

Nën udhëheqjen e V.D. Timakov filloi krijimin e një seksioni të ri të mikrobiologjisë mjekësore - studimin e formave L të baktereve dhe mikoplazmave. Ky drejtim ishte një vazhdim logjik i studimit të formave të filtrimit, nga të cilat V.D. Timakov filloi veprimtarinë e tij shkencore. Për një seri studimesh për të sqaruar rolin e formave L të baktereve dhe familjes së mikoplazmës në sëmundjet infektive, V.D. Timakov së bashku me profesorin G.Ya. Kagan u nderua me Çmimin Lenin në 1974.
Një nga drejtimet kryesore të veprimtarisë shkencore të V.D. Timakova është e përkushtuar ndaj gjenetikës së mikroorganizmave. V.D. Timakov e konsideroi të nevojshme përdorimin e analizave gjenetike për të zgjidhur problemet mikrobiologjike dhe epidemiologjike të rëndësishme mjekësore. Dhe aktualisht, drejtimi i punës për gjenetikën e baktereve është ai kryesor në Institutin e Epidemiologjisë dhe Mikrobiologjisë me emrin. Gamaleya. Aktivitetet e V.D. Përpjekjet e Timakova për të rindërtuar gjenetikën nuk ishin të kufizuara në kryerjen e kërkimeve të saj. Ai bëri një sasi të madhe për të rikrijuar gjenetikën në të gjithë vendin tonë.
Përveç pasionit për punën e tij, Vladimir Dmitrievich karakterizohej nga një mendje e qartë, kuptimi i jetës dhe guximi. Cilësia e fundit u demonstrua plotësisht në luftën e tij kundër zbulimeve "të mëdha" anti-shkencore, të tilla si ato që pretendonin se viruset mund të shndërroheshin në baktere.

Mikrobiologu i shquar rus N.F.GAMALEYA (1859-1949), i cili në vitin 1886 punoi me Pasterin për tërbimin, së bashku me Mechnikov dhe Bardakh themeluan stacionin e parë bakterologjik në Rusi, ku u prodhua një vaksinë kundër tërbimit dhe njerëzit u vaksinuan kundër tërbimit. N.F. Gamaleya është autor i shumë veprave shkencore kushtuar tërbimit, kolerës dhe problemeve të tjera të mikrobiologjisë dhe imunologjisë.

L.A. ZILBER (1894-1966) është themeluesi i teorisë virale të origjinës së tumoreve, ai izoloi agjentin shkaktar të encefalitit të Lindjes së Largët nga rriqrat.

Përparimet në studimin e antigjeneve të tumorit frymëzojnë L.A. Zilber për të provuar vaksinimin antitumor, të cilin ai e filloi rreth vitit 1950. së bashku me Z.L. Baidakova dhe R.M. Radzikhovskaya në dy modele: Tumori Brown-Pierce tek lepujt dhe kanceri spontan i gjirit tek minjtë.

P.F. ZDRODOVSKY (1890-1976) u mor me problemin e sëmundjeve rikeciale, malaries, brucelozës dhe rregullimit të imunitetit.

Zinaida Vissarionovna ERMOLYEVA është krijuesja e antibiotikut të parë vendas. Nga të gjitha arritjet e përparimit shkencor dhe teknologjik, zbulimi i antibiotikëve, dhe në radhë të parë i penicilinës, është padyshim i një rëndësie më të madhe për ruajtjen e shëndetit të njerëzve dhe rritjen e jetëgjatësisë së tyre. Ndër shkencëtarët e shquar të vendit tonë që kanë dhënë një kontribut të madh në zhvillimin e kësaj fushe të mjekësisë, një nga vendet kryesore i takon me të drejtë krijuesit të antibiotikut të parë vendas, një mikrobiologu të shquar, një organizatori i talentuar i kujdesit shëndetësor, një publiku i njohur. figurë, një mësuese e mrekullueshme, akademike e Akademisë së Shkencave Mjekësore të BRSS, Shkencëtare e nderuar e RSFSR-së, laureate e Çmimit Shtetëror të BRSS Zinaida Vissarionovna Ermolyeva. Krahas shkencëtarëve të tjerë, ajo qëndroi në zanafillën e bakterokimisë mjekësore dhe studimit të antibiotikëve në vendin tonë, ishte një person me talent të madh organizativ dhe energji të pashtershme, puna e palodhur dhe cilësitë e jashtëzakonshme personale i dhanë respekt dhe njohje universale.

Një nga fushat e rëndësishme të veprimtarisë shkencore të Zinaida Vissarionovna është studimi i kolerës. Bazuar në studime të thelluara, gjithëpërfshirëse të morfologjisë dhe biologjisë së kolerës dhe vibrieve të ngjashme me kolerën, Z. V. Ermolyeva propozoi një metodë të re për diagnozën diferenciale të këtyre mikroorganizmave.

Në vitin 1942, u botua monografia e Z.V. Ermolyeva "Kolera", e cila përmblodhi rezultatet e pothuajse 20 viteve të studimit të Vibrio cholerae. Kjo monografi ofron metoda të reja për diagnostikimin laboratorik, trajtimin dhe parandalimin e kolerës.
Zinaida Vissarionovna i kushtoi një pjesë të konsiderueshme të punës së saj shkencore izolimit dhe studimit të substancave që kanë një efekt antibakterial. Substanca e parë e tillë, e quajtur "lizozima", u izolua nga Z. V. Ermolyeva së bashku me I. S. Buyanovskaya në vitin 1929. Siç treguan rezultatet e kërkimeve të mëtejshme, lizozima gjendet në shumë inde, me origjinë shtazore dhe bimore.

Në vitin 1960, një grup shkencëtarësh të kryesuar nga Z.V. Ermolyeva, për herë të parë në vendin tonë, morën ilaçin antiviral interferon. Ky medikament u përdor për herë të parë për trajtimin e gripit të rëndë në vitin 1962 dhe si një profilaktik. Ilaçi aktualisht përdoret për parandalimin e gripit dhe infeksioneve të tjera virale akute të frymëmarrjes, si dhe për trajtimin e një sërë sëmundjesh virale në praktikën e syve dhe lëkurës.

Zinaida Vissarionovna i kushtoi më shumë se 30 vjet të jetës së saj (1942-1974) studimit të antibiotikëve.

Emri i Z.V. Ermolyeva është i lidhur pazgjidhshmërisht me krijimin e penicilinës së parë shtëpiake, zhvillimin e shkencës së antibiotikëve dhe përdorimin e tyre të gjerë në vendin tonë. Numri i madh i të plagosurve në periudhën e parë të Luftës së Madhe Patriotike kërkonte zhvillim intensiv dhe futje të menjëhershme në praktikën mjekësore të barnave shumë efektive për të luftuar infeksionin e plagëve. Ishte në këtë kohë (1942) që Z.V. Ermolyeva dhe kolegët e saj në Institutin All-Union të Epidemiologjisë dhe Mikrobiologjisë gjetën një prodhues aktiv të penicilinës dhe izoluan penicilinën e parë vendase - krustosin. Tashmë në vitin 1943, laboratori filloi përgatitjen e penicilinës për provat klinike.

Më vonë, nën udhëheqjen e Z.V. Ermolyeva, u krijuan dhe u futën në prodhim shumë antibiotikë të rinj dhe format e tyre të dozimit, duke përfshirë ekmolinën, ekmonovocilinën, bicilinën, streptomicinën, tetraciklinën; preparate të kombinuara antibiotike (dipasfen, ericiklinë, etj.). Duhet theksuar se Zinaida Vissarionovna gjithmonë ka marrë pjesë aktive në organizimin e prodhimit industrial të antibiotikëve në vendin tonë.

Mjeku dhe shkencëtari gjerman Robert Koch (1843-1910) mori çmimin Nobel për punën e tij mikrobiologjike kundër tuberkulozit. Ai gjithashtu krijoi shumë metoda themelore për kërkimin mikrobiologjik, disa prej të cilave përdoren edhe sot.

Puna e një jete

Në fund të shekullit të 19-të, tuberkulozi vrau pothuajse një të tretën e të gjithë të rriturve të moshës së mesme në Evropë. Mjekët dhe shkencëtarët e asaj kohe bënë përpjekje të shumta për të gjetur një kurë. Koch Robert nuk ishte përjashtim; lufta kundër kësaj sëmundjeje të rëndë u bë misioni i tij, puna e gjithë jetës së tij. Pavarësisht se ka bërë përparim të jashtëzakonshëm në identifikimin dhe trajtimin e mundshëm të kësaj sëmundjeje, madje edhe duke marrë çmimin Nobel në Mjekësi për këtë punë, shkencëtari nuk ndaloi kurrë së përmirësuari metodat e kërkimit që patën një ndikim të madh në të gjithë mikrobiologjinë.

Rinia dhe zgjedhja e profesionit

Prindërit e shkencëtarit të ardhshëm ishin minatorë të varfër, të cilët u mahnitën nga ajo që u kishte dhënë fati një djalë i aftë. I lindur në 1843 në Clausthal (Gjermani), Heinrich Hermann Robert Koch ishte një fëmijë i vërtetë mrekullie si fëmijë. Në moshën pesë vjeçare ai tashmë lexonte gazeta, dhe pak më vonë u interesua për letërsinë klasike dhe ishte ekspert në shah. Interesi im për shkencën filloi në shkollën e mesme, ku zgjodha biologjinë si lëndën time të preferuar.

Në vitin 1866, në moshën 23-vjeçare, Heinrich Robert Koch mori diplomën e doktoraturës dhe kaloi dekadën e ardhshme duke punuar si mjek në shoqëri të ndryshme shkencore spitalore dhe qeveritare. Në 1876, ai botoi kërkimin e tij të madh mbi sëmundjen e antraksit, e cila i solli atij famë të gjerë. Disa vite më vonë ai u emërua këshilltar në byronë shëndetësore, ku kaloi pjesën më të madhe të kohës duke u marrë me problemet që lidhen me tuberkulozin.

Përcaktimi i shkakut të tuberkulozit

Mjekësia moderne njeh shumë shkaqe të shumicës së sëmundjeve. Në kohën kur jetoi Koch Robert, kjo njohuri nuk ishte aq e zakonshme. Një nga zbulimet e para të rëndësishme të shkencëtarit ishte identifikimi i Mycobacterium tuberculosis, i cili shkakton këtë sëmundje fatale. Robert Koch, ndërsa studionte shkaqet e infeksionit, infektoi qëllimisht derrat gini me materiale nga një nga tre kafshët e infektuara: majmunët, bagëtitë dhe njerëzit. Si rezultat, u zbulua se bakteret e derrave të infektuar ishin identike me ato me të cilat ishin infektuar, pavarësisht nga burimi i infeksionit.

Postulatet e Koch

Çfarë kontributi dha Robert Koch në mikrobiologji? Një nga metodat më me ndikim ishte propozimi që agjenti shkaktar i një sëmundjeje mund të identifikohej me një shkallë të lartë besimi nëse plotësoheshin katër kushte, të cilat më vonë u bënë të njohura si postulatet e Koch-ut. Këtu ata janë:

1. Mikroorganizmi duhet të shkaktojë sëmundje në të gjithë organizmat në të cilët është i pranishëm me bollëk, prandaj nuk duhet të jenë të pranishëm në organizmat e pa infektuar.
2. Mikrobi i dyshuar duhet të izolohet dhe të rritet në formën e tij të pastër.
3. Rifutja e mikrobit duhet të shkaktojë sëmundje në organizmat e painfektuar më parë.
4. Mikrobi i dyshuar duhet të riizolohet nga organizmi testues, të rritet në formë të pastër dhe identik me mikrobin e izoluar fillimisht.

Themelues i bakteriologjisë dhe mikrobiologjisë

Ndër sëmundjet e studiuara nga mjeku gjerman Robert Koch (antraksi në 1876 dhe tuberkulozi në 1882), kishte edhe kolera në 1883. Në vitin 1905, shkencëtarit iu dha Çmimi Nobel në Fiziologji ose Mjekësi. Ndërsa ishte ende student i mjekësisë, Heinrich Hermann Robert Koch kishte një interes të madh për patologjinë dhe sëmundjet infektive. Si mjek, ai punoi në shumë qytete të vogla në të gjithë Gjermaninë, dhe gjatë Luftës Franko-Prusiane (1870-1872) ai doli vullnetar në front si kirurg ushtarak.

Më vonë ai u emërua si një mjek lokal, përgjegjësia kryesore e të cilit ishte të studionte përhapjen e sëmundjeve bakteriale infektive. Aplikimi i bioteknologjisë në mjekësi ende mbështetet shumë në parimet e Koch për të dokumentuar shkaqet e sëmundjeve infektive. Shkencëtari i madh vdiq në vitin 1910 në rajonin e Pyjeve të Zi (Gjermani), ai ishte 66 vjeç.

Hulumtimi i antraksit

Në kohën kur jetonte Robert Koch, antraksi ishte i përhapur në mesin e kafshëve të fermave në zonën e Wöllstein. Shkencëtari nuk kishte asnjë pajisje shkencore në atë moment, bibliotekat dhe kontaktet me shkencëtarët e tjerë ishin të paarritshëm. Megjithatë, kjo nuk e ndaloi atë dhe ai filloi të studionte këtë sëmundje. Laboratori i tij ishte një apartament me 4 dhoma, që ishte shtëpia e tij dhe pajisja kryesore ishte një mikroskop, dhuratë nga gruaja e tij.

Bacilet Pollender, Rayer dhe Davaine ishin zbuluar më parë si agjentë shkaktarë të antraksit dhe Koch u nis për të vërtetuar shkencërisht se ky bacil ishte në fakt shkaku i sëmundjes. Ai inokuloi minjtë duke përdorur patate të skuqura druri të bëra vetë me bacilet e antraksit të marra nga shpretka e kafshëve të fermës që kishin ngordhur nga sëmundja. U zbulua se vdekja e brejtësve ka ndodhur pikërisht si pasojë e hyrjes së infeksionit në gjakun e kafshëve. Ky fakt konfirmoi gjetjet e shkencëtarëve të tjerë të cilët argumentuan se sëmundja mund të transmetohej përmes gjakut të kafshëve që vuajnë nga antraksi.

Bacilet e antraksit janë rezistente ndaj mjedisit të jashtëm

Por kjo nuk e kënaqi Koch. Ai gjithashtu donte të dinte nëse këto mikrobe mund të shkaktojnë sëmundje nëse nuk do të kishin qenë kurrë në kontakt me ndonjë lloj organizmi shtazor. Për të zgjidhur këtë problem, ai mori kultura të pastra të bacileve. Robert Koch, duke i studiuar dhe fotografuar ato, doli në përfundimin se në kushte të pafavorshme prodhojnë spore që mund të përballojnë mungesën e oksigjenit dhe faktorë të tjerë negativë për bakteret. Kështu, ata mund të mbijetojnë në mjedisin e jashtëm për një kohë mjaft të gjatë dhe kur krijohen kushte të përshtatshme, u kthehet vitaliteti, nga sporet dalin bacilet, të afta për të infektuar organizmat e gjallë në të cilët hyjnë, pavarësisht se më parë kanë pasur asnjë kontakt me ta.

Robert Koch: zbulimet dhe arritjet

Rezultatet e punës së tij të mundimshme mbi antraksin iu demonstruan nga Koch Ferdinand Cohn, profesor i botanikës në Universitetin e Breslaut, i cili mblodhi kolegët e tij për të dëshmuar zbulimin. Mes të pranishmëve ishte edhe profesori i Patologjisë Anatomike Konheim. Të gjithëve u impresionuan thellësisht puna e Koch, dhe pas botimit të një punimi mbi këtë temë në një revistë botanike në 1876, Koch u bë menjëherë i famshëm. Megjithatë, ai vazhdoi të punojë për Wöllstein për katër vjet të tjera, dhe gjatë kësaj periudhe kohore ai përmirësoi metodat e tij të regjistrimit, ngjyrosjes dhe fotografimit të baktereve.

Jeta në Berlin

Më vonë, tashmë në Berlin, ai vazhdoi të përmirësonte metodat bakteriologjike, si dhe të shpikte të reja - rritja e baktereve të pastra në media të ngurta, siç janë patatet. Fusha në të cilën Robert Koch vazhdoi të punonte, mikrobiologjia, mbeti specialiteti i tij i ngushtë deri vonë. Ai gjithashtu zhvilloi metoda të reja të ngjyrosjes së baktereve që i bënë ato më të dukshme dhe ndihmuan në identifikimin e tyre. Rezultati i gjithë kësaj pune ka qenë futja e metodave me të cilat bakteret patogjene mund të merren thjesht dhe lehtësisht në kulturë të pastër, pa organizma të tjerë dhe me anë të të cilave mund të zbulohen dhe identifikohen. Dy vjet pasi mbërriti në Berlin, Koch zbuloi bacilin e tuberkulozit, si dhe një metodë për rritjen e tij në formën e tij të pastër.

Luftimi i kolerës

Koch ishte ende i zënë duke punuar kundër tuberkulozit kur, në 1883, ai u dërgua në Egjipt si udhëheqës i një komisioni gjerman për të hetuar një shpërthim të kolerës në atë vend. Këtu ai zbuloi Vibrion, që shkakton sëmundjen dhe solli kultura të pastra në Gjermani. Ai gjithashtu u mor me një çështje të ngjashme në Indi. Bazuar në njohuritë e tij për biologjinë dhe mënyrën e përhapjes së Vibrio cholerae, shkencëtarët formuluan rregulla për luftimin e epidemisë, të cilat u miratuan nga Fuqitë e Mëdha në Dresden në 1893 dhe formuan bazën e metodave të kontrollit që përdoren edhe sot.

Emërimi në poste të larta

Në 1885, Robert Koch, biografia e të cilit e ka origjinën nga një qytet i vogël dhe një familje e varfër, u emërua profesor i higjienës në Universitetin e Berlinit. Më 1890 u emërua kirurg i përgjithshëm dhe në 1891 u bë profesor emeritus i Fakultetit të Mjekësisë dhe drejtor i Institutit të ri të Sëmundjeve Infektive. Gjatë kësaj periudhe, Koch iu kthye punës së tij në luftën kundër tuberkulozit. Ai u përpoq ta ndalonte sëmundjen me një ilaç që ai e quajti tuberkulin, i krijuar nga mykobakteret. U krijuan dy versione të drogës. E para prej të cilave shkaktoi menjëherë polemika të rëndësishme. Fatkeqësisht, fuqia shëruese e kësaj droge u ekzagjerua shumë dhe shpresat e vendosura mbi të nuk u justifikuan. Tuberkulina e re (versioni i dytë) u shpall nga Koch në 1896 dhe vlera e saj medicinale ishte gjithashtu një zhgënjim, por megjithatë çoi në zbulimin e substancave me vlerë diagnostike.

Dhe pastaj murtaja, malaria, trypanosomiasis...

Në 1896, Koch udhëtoi për në Afrikën e Jugut për të studiuar origjinën e dëmtuesve. Përkundër faktit se shkaku i kësaj sëmundjeje nuk u zbulua, shpërthimi ishte ende i frenuar. Kjo u pasua nga puna në Indi dhe Afrikë për malarinë, ethet Blackwater, trypanosomiasis dhe murtajën. Publikimi i vëzhgimeve të tij mbi këto sëmundje ishte në vitin 1898. Menjëherë pas kthimit të tij në Gjermani, udhëtimet e tij nëpër botë vazhduan. Këtë herë ishte Italia, ku ai konfirmoi punën e Sir Ronald Ross për malarien dhe kreu një punë të dobishme për etiologjinë e formave të ndryshme të malaries dhe kontrollin e tyre me kininë.

Kontributi në mikrobiologji: çmime nderi dhe medalje

Pikërisht gjatë këtyre viteve të fundit të jetës së tij, Koch arriti në përfundimin se bacilet që shkaktojnë tuberkulozin tek njerëzit dhe te bagëtia nuk janë identike. Deklarata e tij në Kongresin Ndërkombëtar Mjekësor kundër Tuberkulozit në Londër në vitin 1901 shkaktoi shumë polemika, por tashmë dihet se këndvështrimi i Koch ishte i saktë. Puna e tij mbi tifonë çoi në idenë se sëmundja transmetohej shumë më shpesh nga personi në person sesa nga uji i pijshëm, dhe kjo çoi në masa të reja kontrolli.

Në dhjetor 1904, Koch u dërgua në Afrikën Lindore për të studiuar ethet e bagëtive, ku ai bëri vëzhgime të rëndësishme jo vetëm për sëmundjen, por edhe për speciet patogjene Babesia dhe Trypanosoma dhe spiroketozën e rriqrave. Profesor Robert Koch është vlerësuar me shumë çmime dhe medalje, anëtarësim nderi në shoqëritë dhe akademitë shkencore në Berlin, Vjenë, Napoli, Nju Jork e të tjera. Atij iu dha Urdhri Gjerman i Kurorës, Kryqi i Madh i Urdhrit Gjerman të Shqiponjës së Kuqe. Në një sërë vendesh, për nder të mikrobiologut të madh u ngritën memoriale dhe monumente. Dr. Koch vdiq më 27 maj 1910 në Baden-Baden.

Gjermania ka prodhuar shumë mendje shkencore novatore gjatë shekujve, me një nga shkencëtarët më të mëdhenj të kohës së tij Robert Heinrich Hermann Koch, i cili hodhi themelet për studimin e bakteriologjisë dhe ndihmoi në shpjegimin e shkaqeve dhe trajtimeve të mundshme për sëmundje të ndryshme bakteriale.

Ai ishte një studiues i patrembur pasi ishte përgjegjës për kryerjen e përpjekjeve të paprecedentë për të studiuar sëmundjet kërcënuese për jetën si antraksi, tuberkulozi dhe shumë të tjera. Ky shkencëtar erudit luajti një rol të rëndësishëm edhe në krijimin e laboratorëve modernë. Robert Koch nuk ishte thjesht një shkencëtar i talentuar, ai ishte një gjeni, dhe numri i çmimeve dhe medaljeve që mori gjatë gjithë jetës së tij shërben si dëshmia më e mirë e kontributit që ai dha në shkencën mjekësore botërore.

Ambiente të veçanta.

Në bakteriologji përdoren gjerësisht lëndë ushqyese të thata të prodhuara në mënyrë industriale, të cilat janë pluhura higroskopik që përmbajnë të gjithë përbërësit e mediumit përveç ujit. Për përgatitjen e tyre, përdoren tretje triptike të produkteve joushqimore të lira (mbetje peshku, miell mishi dhe kockash, kazeinë teknike). Ato janë të përshtatshme për transport, mund të ruhen për një kohë të gjatë, i çlirojnë laboratorët nga procesi i madh i përgatitjes së mediave dhe i afrojnë ata me zgjidhjen e çështjes së standardizimit të mediave. Industria mjekësore prodhon media të thata Endo, Levin, Ploskirev, agar sulfit bismut, agar lëndë ushqyese, karbohidrate me tregues BP dhe të tjera.

Termostatet

Termostatët përdoren për kultivimin e mikroorganizmave.

Një termostat është një pajisje që mban një temperaturë konstante. Pajisja përbëhet nga një ngrohës, dhomë, mure të dyfishta, midis të cilave qarkullon ajri ose uji. Temperatura rregullohet nga një termostat. Temperatura optimale për riprodhimin e shumicës së mikroorganizmave është 37°C.

MËSIMI 7

TEMA: METODAT PËR IZOLIMIN E KULTURËS SË PASTËR TË AEROBËVE. HAPA TË IZOLIMIT TË KULTURËS SË PASTËR TË BAKTEREVE AEROBIKE ME METODA E SHKARTËSIMIT MEKANIKE

Plani i mësimit

1. Koncepti i "kulturës së pastër" të baktereve

2. Metodat për izolimin e kulturave të pastra me ndarje mekanike

3. Metodat biologjike për izolimin e kulturave të pastra

4. Metodat për identifikimin e baktereve

Qëllimi i mësimit: Të njohë studentët me metoda të ndryshme të izolimit të kulturave të pastra, të mësojë se si të mbillet me një lak, goditje dhe një injeksion

Udhëzimet për demonstrimin

Në habitatin e tyre natyror, bakteret gjenden në shoqata. Për të përcaktuar vetitë e mikrobeve dhe rolin e tyre në zhvillimin e procesit patologjik, është e nevojshme të kemi baktere në formë popullatash homogjene (kultura të pastra). Një kulturë e pastër është një koleksion i individëve bakterialë të së njëjtës specie të rritur në një mjedis ushqyes.

Metodat për izolimin e kulturave të pastra të baktereve aerobe

Metoda e Pasterit Metoda Koch Biologjike Fizike

(ka instalime elektrike historike)

Kuptimi)

Metoda Kimike

Shchukevich

Moderne

Mbjellje me lak Mbjellja me shpatull

(Metoda Drigalski)

Metodat për izolimin e kulturave të pastra:

1. Metodat e ndarjes mekanike bazohen në ndarjen e mikrobeve me fërkim sekuencial të materialit testues mbi sipërfaqen e agarit.

a) Metoda e Pasteur - ka rëndësi historike, parashikon hollimin vijues të materialit të provës në një mjedis ushqyes të lëngshëm me metodën e rrotullimit

b) Metoda e Koch - metoda e pllakës - bazohet në hollimin sekuencial të materialit testues me agar pepton mishi, i ndjekur nga derdhja e epruvetave me materialin e holluar në enët Petri.

c) Metoda Drigalsky - kur mbillni material të mbjellë me mikroflora, përdorni 2-3 gota për mbjellje sekuenciale me një shpatull.

d) Mbjellja me lak në goditje paralele.

2. Metodat biologjike bazohen në vetitë biologjike të patogjenëve.

a) Biologjik - infeksion i kafshëve shumë të ndjeshme, ku mikrobet shumohen dhe grumbullohen shpejt. Në disa raste, kjo metodë është e vetmja që lejon izolimin e një kulture të patogjenit nga një person i sëmurë (për shembull, me tularemi), në raste të tjera është më e ndjeshme (për shembull, izolimi i pneumokokut te minjtë e bardhë ose patogjeni i tuberkulozi në derrat gini).

b) Kimike – bazuar në rezistencën acidike të mykobaktereve. Për të çliruar materialin nga flora shoqëruese, ai
trajtohet me tretësirë ​​acidi. Vetëm bacilet e tuberkulozit do të rriten, pasi mikrobet rezistente ndaj acidit vdiqën nën ndikimin e acidit.

c) Metoda fizike bazohet në rezistencën e sporeve ndaj nxehtësisë. Për të izoluar një kulturë të baktereve që formojnë spore nga
përzierjet, materiali nxehet në 80°C dhe inokulohet në një mjedis ushqyes. Vetëm bakteret spore do të rriten, pasi sporet e tyre mbetën të gjalla dhe nxitën rritjen.

d) Metoda e Shchukevich - bazuar në lëvizshmërinë e lartë të Proteus vulgaris, i aftë për të prodhuar rritje zvarritëse.

Mënyra e përgatitjes së agarit në pjatë

MPA shkrihet në një banjë uji, pastaj ftohet në 50-55°C. Qafa e shishes digjet në flakën e një llambë alkooli, enët Petri hapen në mënyrë që qafa e shishes të futet pa prekur skajet e enës, hidhet 10-15 ml MPA, kapaku është. mbyllet, ena tundet në mënyrë që mediumi të shpërndahet në mënyrë të barabartë dhe lihet në një sipërfaqe horizontale derisa të ngurtësohet. Pas tharjes, pllakat e agarit të pllakave ruhen në të ftohtë.

Mbjellja e lakut

Duke përdorur një lak steril të ftohur, merrni një pikë materiali, hapni njërën skaj të filxhanit me dorën tuaj të majtë, futeni lakin brenda dhe bëni disa goditje në një vend me një lak në skajin e kundërt, më pas grijeni lakin dhe inokuloni. materiali në lëvizje paralele nga njëra skaj i kupës në tjetrën me një interval prej 5-6 mm. Në fillim të mbjelljes, kur ka shumë mikrobe në lak, ato do të japin rritje konfluente, por me çdo goditje ka gjithnjë e më pak mikrobe në lak, dhe ata do të mbeten të vetmuar dhe do të prodhojnë koloni të izoluara.

Mbjellja sipas metodës Drigalsky

Kjo metodë përdoret kur inokulohet materiali shumë i kontaminuar me mikroflora (qelb, feces, pështymë). Për të mbjellë duke përdorur metodën Drigalsky, merrni një shpatull dhe disa gota (3-4). Një shpatull është një mjet i bërë nga tela metalike ose shigjetë qelqi, e përkulur në një trekëndësh ose në formë L. Materiali futet në filxhanin e parë me një lak ose pipetë dhe shpërndahet në mënyrë të barabartë me një shpatull mbi sipërfaqen e mediumit; me të njëjtën shpatull, pa e djegur, materiali fërkohet në mediumin ushqyes në filxhanin e dytë dhe më pas. në të tretën. Me një mbjellje të tillë, kupa e parë do të ketë rritje konfluente, dhe kolonitë e izoluara do të rriten në kupat pasuese.