Μικροβιολογική απομόνωση καθαρών καλλιεργειών με μέθοδο Koch. Μέθοδοι σποράς και καλλιέργειας βακτηρίων. Μέθοδοι για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών αερόβιων

Η μέθοδος Koch χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του συνολικού αριθμού βακτηρίων. 1 ml του υλικού δοκιμής από την κατάλληλη αραίωση χύνεται σε ένα άδειο αποστειρωμένο τρυβλίο Petri και 10 - 15 ml λιωμένου και ψυχθέντος στους 45 0 C MPA χύνεται, αναμιγνύεται με το υγρό, περιστρέφοντας το δίσκο στην επιφάνεια του τραπεζιού.

Μετά την καλλιέργεια των καλλιεργειών, μετρώνται οι αποικίες που αναπτύσσονται στην επιφάνεια και στο βάθος του άγαρ. Για να γίνει αυτό, το κύπελλο τοποθετείται ανάποδα σε μαύρο φόντο, κάθε μετρημένη αποικία σημειώνεται με ένα δείκτη στο ποτήρι. Αξιολογήθηκαν μόνο εκείνες οι πλάκες στις οποίες αναπτύχθηκαν 30 έως 300 αποικίες. Εάν έχουν αναπτυχθεί περισσότερες από 300 αποικίες σε ένα πιάτο και η ανάλυση δεν μπορεί να επαναληφθεί, τότε οι αποικίες μπορούν να μετρηθούν υπό έντονο πλευρικό φωτισμό χρησιμοποιώντας μεγεθυντικό φακό και ειδική πλάκα με πλέγμα.

Ο αριθμός των αποικιών μετράται σε τουλάχιστον 20 τετράγωνα με εμβαδόν 1 cm 2 σε διαφορετικά σημεία της πλάκας. Ο μέσος αριθμός αποικιών ανά 1 cm2 υπολογίζεται και πολλαπλασιάζεται με την περιοχή του πιάτου.

Κατά την καταμέτρηση των αποικιών, μπορεί να χρησιμοποιηθεί μια ειδική συσκευή μέτρησης βακτηρίων, το PSB.

Το αποτέλεσμα της μέτρησης των αποικιών σε κάθε πιάτο είναι ο αριθμός των βακτηρίων ανά 1 ml (cm 3) ή 1 g του υλικού δοκιμής, λαμβάνοντας υπόψη την αραίωση. Ο τελικός αριθμός βακτηρίων λαμβάνεται ως ο αριθμητικός μέσος όρος των αποτελεσμάτων της μέτρησης των αποικιών σε πλάκες εμβολιασμένες με δύο παρακείμενες αραιώσεις.

Παράδειγμα:αραίωση 10 -1 - 250 αποικίες, αραίωση 10 -2 - 23 αποικίες.

Συνολικός αριθμός βακτηρίων = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu/ml = 2,4 x 10 2 cfu/ml (μονάδες σχηματισμού αποικιών ανά ml).

Το αποτέλεσμα της έρευνας μπορεί να στρογγυλοποιηθεί σε 2 - 3 σημαντικά ψηφία.

Μέθοδος τιτλοδότησης.

Χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του αριθμού των SPM.

1ο στάδιο:ομογενοποίηση του υλικού. Εάν είναι απαραίτητο, παρασκευάστε ένα εναιώρημα για τη μεταφορά μικροοργανισμών στην υγρή φάση.

2ο στάδιο:προετοιμασία μιας σειράς αραιώσεων.

3ο στάδιο:σπορά επιλεγμένων όγκων του υλικού δοκιμής (100, 10, 1 ml) και των αραιώσεων του 1 ml σε υγρό θρεπτικό μέσο. Για να αυξηθεί η ακρίβεια της μεθόδου, κάθε όγκος μπορεί να ενοφθαλμιστεί παράλληλα σε πολλά τμήματα του θρεπτικού μέσου (σπορά δύο, τριών, πέντε σειρών). Το βέλτιστο είναι μια τριπλή επανάληψη (επαρκής αξιοπιστία με σχετικά χαμηλό κόστος).

4ο στάδιο:λαμβάνοντας υπόψη την παρουσία ανάπτυξης σε υγρό θρεπτικό μέσο και σπορά από θετικούς όγκους σε στερεό θρεπτικό μέσο.

5ο στάδιο:ταυτοποίηση μικροοργανισμών που αναπτύσσονται σε στερεό θρεπτικό μέσο. Σε αυτή την περίπτωση λαμβάνονται υπόψη οι πολιτιστικές ιδιότητες και, εάν κριθεί απαραίτητο, πραγματοποιούνται πρόσθετες μελέτες (μελέτη βαμβικών, μορφολογικών, βιοχημικών και ορολογικών ιδιοτήτων).

Εάν χρησιμοποιείται η μέθοδος μιας σειράς, κατά κανόνα, το αποτέλεσμα εκφράζεται με τη μορφή ενός τίτλου του επιθυμητού μικροοργανισμού, ο οποίος θεωρείται ότι είναι ο μικρότερος όγκος (υψηλότερη αραίωση) στον οποίο βρέθηκε ακόμη.

Εάν χρησιμοποιήθηκε μέθοδος πολλαπλών σειρών, τα αποτελέσματα καταγράφονται χρησιμοποιώντας ειδικούς πίνακες που καθιστούν δυνατό τον προσδιορισμό του τίτλου ή του δείκτη (TNI) με βάση τον συνδυασμό θετικών όγκων που έδωσε ανάπτυξη.

Γ. δημιουργία ευνοϊκών συνθηκών για τη φυσιολογική λειτουργία των κυττάρων

Δ) Οι αρνητικές στη λακτόζη αποικίες αναπτύχθηκαν σε τομείς του μέσου Endo.

D. μειωμένη ευαισθησία των ινσουλινοεξαρτώμενων κυττάρων στην ινσουλίνη υπό την επίδραση γλυκοκορτικοειδών

Σε αντίθεση με τη μέτρηση των κυττάρων στο μικροσκόπιο, αυτή η μέθοδος επιτρέπει

Είναι δύσκολο να προσδιοριστεί μόνο ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων σε έναν πληθυσμό. Δεδομένου ότι δεν υπάρχουν μέσα εξίσου κατάλληλα για την ανάπτυξη διαφόρων μικροοργανισμών, η μέθοδος σποράς καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό του αριθμού των κυττάρων μικροοργανισμών που μπορούν να αναπτυχθούν σε ένα μέσο μιας δεδομένης σύνθεσης, αλλά δεν επιτρέπει να ληφθούν υπόψη εκείνοι οι μικροοργανισμοί που δεν αναπτύσσονται ή αναπτύσσονται εξαιρετικά αργά.

Η μέθοδος χρησιμοποιείται ευρέως για τον προσδιορισμό του αριθμού των βιώσιμων κυττάρων σε διάφορα φυσικά υποστρώματα και σε εργαστηριακά θρεπτικά μέσα. Η ουσία του έγκειται στη σπορά ενός ορισμένου όγκου του δοκιμαστικού εναιωρήματος μικροοργανισμών σε ένα στερεό μέσο σε τρυβλία Petri και στην καταμέτρηση των αποικιών που αναπτύχθηκαν μετά την επώαση. Είναι γενικά αποδεκτό ότι κάθε αποικία είναι απόγονος ενός κυττάρου.

Η εργασία με αυτή τη μέθοδο περιλαμβάνει τρία στάδια: προετοιμασία αραιώσεων, ενοφθαλμισμός σε στερεό μέσο σε τρυβλία Petri και μέτρηση των αναπτυσσόμενων αποικιών.

Παρασκευή αραιώσεων. Ο πληθυσμός των μικροοργανισμών είναι συνήθως αρκετά μεγάλος, επομένως για να ληφθούν απομονωμένες αποικίες είναι απαραίτητο να παρασκευαστεί μια σειρά από σειριακές αραιώσεις. Οι αραιώσεις παρασκευάζονται σε νερό βρύσης ή διάλυμα NaCl 0,85% χρησιμοποιώντας σταθερό συντελεστή αραίωσης, τις περισσότερες φορές ίσο με 10. Κατά τη διάρκεια του πειράματος, συνιστάται η χρήση του ίδιου συντελεστή αραίωσης, καθώς αυτό μειώνει την πιθανότητα σφάλματος. Για την παρασκευή αραιώσεων, 9 ml αποστειρωμένου νερού βρύσης χύνονται σε στείρους ξηρούς δοκιμαστικούς σωλήνες. Στη συνέχεια, 1 ml του εναιωρήματος δοκιμής μεταφέρεται με μια αποστειρωμένη πιπέτα σε δοκιμαστικό σωλήνα με 9 ml αποστειρωμένου νερού - αυτή είναι η 1η αραίωση, 10 -1. Η προκύπτουσα αραίωση αναμιγνύεται επιμελώς με μια νέα αποστειρωμένη πιπέτα, τραβώντας το προκύπτον εναιώρημα μέσα στην πιπέτα και απελευθερώνοντάς το από αυτήν. Αυτή η διαδικασία εκτελείται 3-5 φορές, στη συνέχεια λαμβάνεται 1 ml του προκύπτοντος εναιωρήματος με την ίδια πιπέτα και μεταφέρεται στον 2ο δοκιμαστικό σωλήνα - λαμβάνεται η 2η αραίωση, 10 -2. Οι επόμενες αραιώσεις παρασκευάζονται με τον ίδιο τρόπο. Ο βαθμός αραίωσης εξαρτάται από την πυκνότητα του μικροβιακού πληθυσμού που μελετάται. Συνεπώς, όσο μεγαλύτερη είναι η πληθυσμιακή πυκνότητα, τόσο μεγαλύτερη είναι.

Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε μια νέα πιπέτα για κάθε αραίωση. Η παραμέληση αυτού του κανόνα οδηγεί σε λανθασμένο αποτέλεσμα.

Σπορά. Το εναιώρημα μπορεί να σπαρθεί είτε επιφανειακά είτε βαθιά.

Πριν από τη σπορά με τη μέθοδο της επιφάνειας (Εικ. 16), το τηγμένο, τις περισσότερες φορές αγαροποιημένο, θρεπτικό μέσο χύνεται σε μια σειρά αποστειρωμένων τρυβλίων Petri, 15-20 ml το καθένα. Τα κύπελλα αφήνονται σε οριζόντια επιφάνεια μέχρι να σκληρύνει το μέσο. Συνιστάται η ξήρανση της επιφάνειας των μέσων άγαρ πριν από τη σπορά για την απομάκρυνση του νερού συμπύκνωσης. Για το σκοπό αυτό, ανοίγουν οι δίσκοι Petri και το κατεψυγμένο μέσο προς τα κάτω τοποθετείται για 20-30 λεπτά σε στεγνωτήριο που έχει θερμανθεί στους 70-80 0 C. Το ντουλάπι πρέπει πρώτα να αποστειρωθεί.

Εικόνα 16. Σχέδιο προετοιμασία αραιώσεων και κοσκίνισμα ενός εναιωρήματος μικροοργανισμών με μια σπάτουλα.

Το μέσο άγαρ μπορεί να στεγνώσει τοποθετώντας τα κύπελλα σε θερμοστάτη για 2-3 ημέρες με τα καπάκια προς τα κάτω. Αφού το μέσο είναι έτοιμο, ένας επακριβώς μετρημένος όγκος (0,05 ή 0,1 ml) της κατάλληλης αραίωσης εφαρμόζεται στην επιφάνειά του με μια αποστειρωμένη πιπέτα και κατανέμεται στην επιφάνεια του μέσου με μια αποστειρωμένη γυάλινη σπάτουλα. Η σπορά σε πυκνό μέσο πραγματοποιείται, κατά κανόνα, από τις τρεις τελευταίες αραιώσεις και από την καθεμία γίνονται 2-4 παράλληλες σπορές. Οι εμβολιασμοί μπορούν να γίνουν με μία πιπέτα, αλλά πρέπει οπωσδήποτε να ξεκινήσετε με μεγαλύτερη αραίωση. Για κάθε αραίωση, χρησιμοποιήστε μια νέα αποστειρωμένη σπάτουλα. Μετά τη σπορά, τα πιάτα Petri τοποθετούνται σε θερμοστάτη με τα καπάκια προς τα κάτω.

Κατά τη βαθιά σπορά (Εικ. 17), ένας επακριβώς μετρημένος όγκος (συνήθως 0,1, 0,5 ή 1 ml) του εναιωρήματος ή της αραίωσης προστίθεται στο λιωμένο και ψυχθέν μέσο άγαρ στους 48-50°, αναμιγνύεται καλά και στη συνέχεια χύνεται αμέσως σε φλιτζάνι Petri. Το μέσο αφήνεται να σκληρύνει. Στην περίπτωση της βαθιάς σποράς χρησιμοποιείται συνήθως το μέσο που χύνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Για εργασίες μεγάλης κλίμακας, το μέσο δεν χύνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες, αλλά γίνεται ως εξής. Με

Εικόνα 17. Σχήμα παρασκευής αραιώσεων και εμβολιασμού εναιωρήματος μικροοργανισμών με τη χρήση της μεθόδου βαθιάς

1 ml από την κατάλληλη αραίωση μεταφέρεται με αποστειρωμένη πιπέτα σε 2-4 αποστειρωμένα τρυβλία Petri. Στη συνέχεια γεμίστε τα κύπελλα με 15-20 ml λιωμένου και ψυχθέντος μέσου στους 48-50° και ανακατέψτε καλά το θρεπτικό μέσο με το εμβόλιο με μια ελαφρά περιστροφική κίνηση του φλιτζανιού στην επιφάνεια του τραπεζιού, μετά την οποία τα κύπελλα αφήνονται σε οριζόντια επιφάνεια μέχρι να στερεοποιηθεί. Όταν το μέσο σκληρύνει, τα πιάτα Petri τοποθετούνται σε θερμοστάτη.

Για τον προσδιορισμό του αριθμού των κυττάρων των αναερόβιων μικροοργανισμών, τρυβλία Petri με πυκνό μέσο τοποθετούνται σε αναερόβια μετά τον εμβολιασμό.

Μετρώντας τις αναπτυγμένες αποικίες. Οι αποικίες βακτηρίων μετρώνται συνήθως μετά από 3, οι αποικίες μυκήτων και ζυμομυκήτων - μετά από 5-7, και οι αποικίες ακτινομυκήτων - μετά από 7-15 ημέρες επώασης σε θερμοστάτη.

Η καταμέτρηση πραγματοποιείται συνήθως χωρίς να ανοίξετε τα πιάτα Petri. Για ευκολία, σημειώστε την υπολογιζόμενη αποικία με μια κουκκίδα στο εξωτερικό του κάτω μέρους του φλιτζανιού χρησιμοποιώντας μελάνι ή μολύβι στο ποτήρι. Εάν υπάρχει μεγάλος αριθμός αποικιών, το κάτω μέρος του πιάτου Petri χωρίζεται σε τομείς, μετράται ο αριθμός των αποικιών σε κάθε τομέα και συνοψίζονται τα αποτελέσματα. Υπάρχουν ειδικοί μετρητές για την καταμέτρηση των αποικιών (Εικ. 18). Για την καταμέτρηση των αποικιών, τοποθετείται ένα τρυβλίο Petri με το καπάκι προς τα κάτω σε ένα αποστειρωμένο τραπέζι (1), που φωτίζεται από κάτω και οι αποικίες μετρώνται με στυλό με μύτη ελατηρίου (2). Η άκρη του στυλό αγγίζει το κάτω μέρος του κυπέλλου στην περιοχή που αντιστοιχεί στη θέση των αποικιών και πιέζει το στυλό. Ως αποτέλεσμα, ένα σημάδι παραμένει στο γυαλί και η θήκη ανεβαίνει, κλείνοντας το κύκλωμα και οι ενδείξεις του μετρητή αυξάνονται κατά μία. Στη συνέχεια, η άκρη του στυλό ανυψώνεται πάνω από το γυαλί, το ελατήριο το επαναφέρει στην αρχική του θέση και το κύκλωμα ανοίγει.

Εικόνα 18 . Μετρητής για την καταμέτρηση του αριθμού των αποικιών μικροοργανισμών

Η καλύτερη αραίωση θα πρέπει να θεωρείται αυτή από την οποία, όταν σπαρθεί σε μια πλάκα άγαρ σε ένα τρυβλίο Petri, αναπτύσσονται 30-50 έως 100-150 αποικίες. Εάν ο αριθμός των αναπτυσσόμενων αποικιών είναι μικρότερος από 10, τότε αυτά τα αποτελέσματα δεν χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του αριθμού των κυττάρων στο αρχικό υλικό. Τα αποτελέσματα των παράλληλων σπορών από την ίδια αραίωση αθροίζονται και προσδιορίζεται ο μέσος αριθμός αποικιών που αναπτύσσονται όταν σπάρονται από μια δεδομένη αραίωση σε ένα τρυβλίο.

Ο αριθμός των κυττάρων σε 1 ml του υποστρώματος δοκιμής υπολογίζεται με

τύπος: M= ΕΝΑ 10n ,

Οπου Μ- αριθμός κυττάρων σε 1 ml, ΕΝΑ- μέσος αριθμός αποικιών κατά τη σπορά μιας δεδομένης αραίωσης, συντελεστής αραίωσης 10, Π- αύξων αριθμός της αραίωσης από την οποία έγινε η σπορά, V- όγκος εναιωρήματος που λαμβάνεται για ενοφθαλμισμό, σε ml.

Εισαγωγή στην πρακτική των βαφών ανιλίνης

Χρήση συστήματος εμβάπτισης και συμπυκνωτή στη μικροσκοπία

Ανάπτυξη μεθόδου καλλιέργειας σε βιολογικά υγρά και στερεά θρεπτικά μέσα

Ανάπτυξη μεθόδου κλασματικής υποσποράς

Ανακάλυψη του αιτιολογικού παράγοντα του άνθρακα, της χολέρας, της φυματίωσης και της φυματίνης

Τα ίδια περίπου χρόνια ιδρύθηκε και λειτούργησε με επιτυχία η γερμανική σχολή μικροβιολόγων, με επικεφαλής τον ROBERT KOCH (1843 - 1910). Ο Koch ξεκίνησε την έρευνά του σε μια εποχή που ο ρόλος των μικροοργανισμών στην αιτιολογία των μολυσματικών ασθενειών αμφισβητήθηκε σοβαρά. Για να το αποδείξουν, απαιτήθηκαν σαφή κριτήρια, τα οποία διατύπωσε ο Κοχ και πέρασαν στην ιστορία με το όνομα «τριάδα Χένλε-Κοχ». Η ουσία της τριάδας ήταν η εξής:

1) το ύποπτο μικροβιακό παθογόνο πρέπει πάντα να ανιχνεύεται μόνο σε μια δεδομένη ασθένεια και να μην απομονώνεται από άλλες ασθένειες ή από υγιή άτομα.

2) το παθογόνο μικρόβιο πρέπει να απομονωθεί σε καθαρή καλλιέργεια.

3) μια καθαρή καλλιέργεια αυτού του μικροβίου θα πρέπει να προκαλέσει ασθένεια σε πειραματόζωα μολυσμένα με κλινική και παθολογική εικόνα παρόμοια με την ανθρώπινη ασθένεια.

Η πρακτική έχει δείξει ότι και τα τρία σημεία έχουν σχετική σημασία, καθώς δεν είναι πάντα δυνατό να απομονωθεί ο αιτιολογικός παράγοντας μιας ασθένειας σε μια καθαρή καλλιέργεια και να προκληθεί μια ασθένεια που είναι χαρακτηριστική για τον άνθρωπο σε πειραματόζωα. Επιπλέον, παθογόνα έχουν βρεθεί σε υγιή άτομα, ειδικά μετά από ασθένεια. Ωστόσο, στα πρώτα στάδια της ανάπτυξης και του σχηματισμού της ιατρικής μικροβιολογίας, όταν πολλοί μικροοργανισμοί που δεν σχετίζονταν με τη νόσο απομονώθηκαν από το σώμα των ασθενών, η τριάδα έπαιξε σημαντικό ρόλο στον εντοπισμό του αληθινού αιτιολογικού παράγοντα της νόσου. Με βάση την ιδέα του, ο Koch απέδειξε τελικά ότι ο μικροοργανισμός που ανακαλύφθηκε προηγουμένως σε ζώα με άνθρακα πληροί τις απαιτήσεις της τριάδας και είναι ο πραγματικός αιτιολογικός παράγοντας αυτής της ασθένειας. Στην πορεία, ο Koch καθιέρωσε την ικανότητα των βακτηρίων του άνθρακα να σχηματίζουν σπόρια.

Ο Koch έπαιξε μεγάλο ρόλο στην ανάπτυξη βασικών μεθόδων για τη μελέτη των μικροοργανισμών. Έτσι, εισήγαγε στη μικροβιολογική πρακτική τη μέθοδο απομόνωσης καθαρών καλλιεργειών βακτηρίων σε στερεά θρεπτικά μέσα, ήταν ο πρώτος που χρησιμοποίησε βαφές ανιλίνης για να κηλιδώσει τα μικροβιακά κύτταρα και χρησιμοποίησε φακούς εμβάπτισης και μικροφωτογραφία για τη μικροσκοπική τους μελέτη.

Το 1882, ο Koch απέδειξε ότι ο μικροοργανισμός που απομόνωσε ήταν ο αιτιολογικός παράγοντας της φυματίωσης, ο οποίος αργότερα ονομάστηκε βάκιλος του Koch. Το 1883, ο Koch και οι συνάδελφοί του απομόνωσαν τον αιτιολογικό παράγοντα της χολέρας - Vibrio cholerae (vibrio του Koch).

Από το 1886, ο Koch έχει αφιερώσει ολόκληρη την έρευνά του στην αναζήτηση φαρμάκων αποτελεσματικών στη θεραπεία ή την πρόληψη της φυματίωσης. Κατά τη διάρκεια αυτών των μελετών, απέκτησε το πρώτο αντιφυματικό φάρμακο - τη φυματίωση, το οποίο είναι ένα εκχύλισμα από καλλιέργεια βακτηρίων της φυματίωσης. Αν και η φυματίνη δεν έχει θεραπευτικό αποτέλεσμα, χρησιμοποιείται με επιτυχία για τη διάγνωση της φυματίωσης.

Το επιστημονικό έργο του Κοχ έλαβε παγκόσμια αναγνώριση και το 1905 τιμήθηκε με το Νόμπελ Ιατρικής.

Χρησιμοποιώντας μεθόδους που αναπτύχθηκαν από τον Koch, Γάλλοι και Γερμανοί βακτηριολόγοι ανακάλυψαν πολλά βακτήρια, σπειροχαίτες και πρωτόζωα - αιτιολογικούς παράγοντες μολυσματικών ασθενειών σε ανθρώπους και ζώα. Μεταξύ αυτών είναι παθογόνα πυωδών και τραυμάτων: σταφυλόκοκκοι, στρεπτόκοκκοι, κλωστρίδια αναερόβιας λοίμωξης, E. coli και παθογόνα εντερικών λοιμώξεων (τύφος και παρατύφος βακτήρια, βακτήρια δυσεντερίας Shiga), ο αιτιολογικός παράγοντας μιας λοίμωξης του αίματος - η σπειροχαίτη της υποτροπιάζουσας πυρετός, παθογόνα του αναπνευστικού και πολλές άλλες λοιμώξεις, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που προκαλούνται από πρωτόζωα (ελονοσία πλασμωδία, αμοιβάδα δυσεντερίας, λεϊσμανία). Αυτή η περίοδος ονομάζεται «χρυσή εποχή» της μικροβιολογίας.

Ο ρόλος των εγχώριων επιστημόνων στην ανάπτυξη της μικροβιολογικής επιστήμης (I.I. Mechnikov, D.I. Ivanovsky, G.N. Gabrichevsky, S.N. Vinogradsky, V.D. Timakov, N.F. Gamaleya, L.A. Zilber, P.F. Zdrodovsky, Z.V. Ermolyeva).

Ένας από τους ιδρυτές της ανοσολογίας ήταν ο I.I. MECHNIKOV (1845-1916), ο δημιουργός της φαγοκυτταρικής, ή κυτταρικής, θεωρίας της ανοσίας. Το 1888, ο Μετσνίκοφ αποδέχτηκε την πρόσκληση του Παστέρ και ηγήθηκε του εργαστηρίου του ινστιτούτου του. Ωστόσο, ο Mechniov δεν διέκοψε τους στενούς δεσμούς με την πατρίδα του. Επισκέφτηκε τη Ρωσία πολλές φορές και πολλοί Ρώσοι γιατροί εργάστηκαν στο εργαστήριό του στο Παρίσι. Μεταξύ αυτών είναι οι Y.Yu.Bardakh, V.A.Barykin, A.M.Bezredka, M.V.Weinberg, G.N.Gabrichevsky, V.I.Isaev, N.N.Klodnitsky, I.G.Savchenko, L.A. Tarasevich, V.A. Khavkins, T.A. ο οποίος συνέβαλε σημαντικά στην ανάπτυξη της εγχώριας και παγκόσμιας μικροβιολογίας, ανοσολογίας και παθολογίας.

Παρά τις σημαντικές προόδους στον τομέα της δημιουργίας αντιμολυσματικής ανοσίας, πρακτικά τίποτα δεν ήταν γνωστό για τους μηχανισμούς ανάπτυξής του. Το σημείο καμπής ήταν η ανακάλυψη του Ι.Ι. Mechnikov (1845-1916), που κατασκευάστηκε από τον ίδιο στη Μεσσήνη το 1882 ενώ μελετούσε την αντίδραση μιας προνύμφης αστερίας στην εισαγωγή ενός αγκάθου τριανταφυλλιάς σε αυτήν. Ήταν εκείνη η ευτυχής περίσταση όταν μια τυχαία παρατήρηση έπεσε σε προετοιμασμένο μυαλό και οδήγησε τον Ι.Ι. Mechnikov στη δημιουργία του δόγματος της φαγοκυττάρωσης, της φλεγμονής και της κυτταρικής ανοσίας.

Το 1892, ο Mechnikov δημοσίευσε το έργο του «Διαλέξεις για τη συγκριτική παθολογία της φλεγμονής», στο οποίο, ως εξαιρετικός στοχαστής, εξέτασε τις παθολογικές διεργασίες από τη σκοπιά της εξελικτικής θεωρίας. Το 1901 εμφανίστηκε το νέο του βιβλίο «Immunity to Infectious Diseases», το οποίο συνόψιζε τα αποτελέσματα πολλών ετών έρευνας στον τομέα της ανοσίας.

Η συζήτηση που εκτυλίχθηκε μεταξύ του Mechnikov και των υποστηρικτών του με τους οπαδούς της χυμικής θεωρίας, που έβλεπαν τη δράση των αντισωμάτων ως βάση της ανοσίας, απέκτησε μεγάλη δημιουργική σημασία. Η μελέτη των αντισωμάτων ξεκίνησε με την εργασία του P. Ehrlich και στη συνέχεια του J. Bordet, που πραγματοποιήθηκε την τελευταία δεκαετία του 19ου αιώνα.

Η συμβολή του PAUL EHRLICH (1854-1915) στην ανάπτυξη της ανοσολογίας, καθώς και στη διαμόρφωση και ανάπτυξη της χημειοθεραπείας, είναι ανεκτίμητη. Αυτός ο επιστήμονας ήταν ο πρώτος που διατύπωσε τις έννοιες της ενεργητικής και παθητικής ανοσίας και ήταν ο συγγραφέας μιας ολοκληρωμένης θεωρίας της χυμικής ανοσίας, η οποία εξηγούσε τόσο την προέλευση των αντισωμάτων όσο και την αλληλεπίδρασή τους με τα αντιγόνα. Η πρόβλεψη του Ehrlich για την ύπαρξη κυτταρικών υποδοχέων που αλληλεπιδρούν ειδικά με ορισμένες ομάδες αντιγόνων έχει αποτελέσει αντικείμενο καταστροφικής κριτικής για πολλά χρόνια. Ωστόσο, αναβίωσε το δεύτερο μισό του 20ου αιώνα στη θεωρία του Burnet και σε μοριακό επίπεδο έλαβε παγκόσμια αναγνώριση.

Ο I.I. Mechnikov ήταν ένας από τους πρώτους που κατάλαβε ότι οι χυμικές και φαγοκυτταρικές θεωρίες της ανοσίας δεν αλληλοαποκλείονται, αλλά αλληλοσυμπληρώνονται. Το 1908, ο Mechnikov και ο Ehrlich τιμήθηκαν από κοινού με το βραβείο Νόμπελ για το έργο τους στον τομέα της ανοσολογίας.

Οι ανακαλύψεις του Έρλιχ:

1. χρήση μπλε του μεθυλενίου στη θεραπεία της ελονοσίας

2. Χρήση του κόκκινου τρυπανίου για τη θεραπεία του τρυπανοσώματος

3. ανακάλυψη του σαλβαρσάν (1907)

4. ανάπτυξη μιας μεθόδου για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας των αντιτοξικών ορών και τη μελέτη της αλληλεπίδρασης αντιγόνου-αντισωμάτων

5. θεωρία χυμικής ανοσίας.

Τέλη 19ου αιώνα σημαδεύτηκε από την εποχική ανακάλυψη του βασιλείου της Βίρα. Ο πρώτος εκπρόσωπος αυτού του βασιλείου ήταν ο ιός του μωσαϊκού του καπνού, που μολύνει τα φύλλα του καπνού, που ανακαλύφθηκε στις 12 Φεβρουαρίου 1892 από τον D.I. IVANOVSKY, υπάλληλο του Τμήματος Βοτανικής του Πανεπιστημίου της Αγίας Πετρούπολης, ο δεύτερος ήταν ο αφθώδης πυρετός. ιός, ο οποίος προκαλεί την ομώνυμη ασθένεια σε οικόσιτα ζώα, που ανακαλύφθηκε το 1898 από τους F. Leffler και P. Frosch. Ωστόσο, αυτές οι ανακαλύψεις δεν μπορούσαν να εκτιμηθούν εκείνη την εποχή και παρέμειναν ελάχιστα αντιληπτές με φόντο τις λαμπρές επιτυχίες της βακτηριολογίας.

Επικεφαλής της βακτηριολογικής σχολής της Μόσχας και ένας από τους ηγέτες των Ρώσων βακτηριολόγων ήταν ο G.N. GABRICHEVSKY (1860-1907), ο οποίος το 1895 ήταν επικεφαλής του Βακτηριολογικού Ινστιτούτου στο Πανεπιστήμιο της Μόσχας, που άνοιξε με ιδιωτικούς πόρους. Εργάστηκε στον τομέα της ειδικής θεραπείας και πρόληψης της οστρακιάς και του υποτροπιάζοντος πυρετού. Η στρεπτοκοκκική θεωρία του για την προέλευση της οστρακιάς κέρδισε τελικά την παγκόσμια αποδοχή. Ο Γκαμπριτσέφσκι είναι ο συγγραφέας του «Οδηγού Κλινικής Βακτηριολογίας για Γιατρούς και Φοιτητές» (1893) και του εγχειριδίου «Ιατρική Βακτηριολογία», το οποίο πέρασε από τέσσερις εκδόσεις. Γ.Ν. Ο Gabrichevsky (1860-1907) εισήγαγε την οροθεραπεία στη Ρωσία και μελέτησε τους μηχανισμούς ανοσίας στον υποτροπιάζοντα πυρετό, τη διφθερίτιδα και την οστρακιά.

Το κύριο κέντρο της βακτηριολογικής σχολής του Pererburg ήταν το Ινστιτούτο Πειραματικής Ιατρικής. Επικεφαλής του βακτηριολογικού τμήματος ορίστηκε ο S.N.VINOGRADSKY, ο οποίος έγινε παγκοσμίως γνωστός για το έργο του στον τομέα της γενικής μικροβιολογίας. Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο των εκλεκτών καλλιεργειών που ανέπτυξε. Ο Winogradsky ανακάλυψε βακτήρια θείου και σιδήρου, νιτροποιητικά βακτήρια - τους αιτιολογικούς παράγοντες της διαδικασίας νιτροποίησης στο έδαφος. Ίδρυσε το ρόλο των μικροοργανισμών στη γεωργία.

V.D. Ο TIMAKOV (1905-1977) είναι ένας από τους ιδρυτές του δόγματος των μυκοπλασμάτων και των L-μορφών βακτηρίων, μελέτησε τη γενετική των μικροοργανισμών, τη βακτηριοφαγία και την πρόληψη μολυσματικών ασθενειών.

Το 1934 ο V.D. Ο Τιμάκοφ προσκλήθηκε στο Ινστιτούτο Μικροβιολογίας και Επιδημιολογίας Turmen, όπου ήταν επικεφαλής του τμήματος για την παραγωγή εμβολίων και ορών. Η συχνότητα των εντερικών λοιμώξεων ήταν ακόμη υψηλή στη δημοκρατία εκείνη την εποχή. V.D. Ο Timakov υπερασπίζεται τη διδακτορική του διατριβή σχετικά με τα προληπτικά φάρμακα κατά των εντερικών λοιμώξεων. Ο νεαρός επιστήμονας πραγματοποιεί επίσης τις πρώτες του μελέτες για βακτηριοφάγους και φιλτραριζόμενους ιούς στο Τουρκμενιστάν.

Υπό την ηγεσία του V.D. Ο Timakov ξεκίνησε τη δημιουργία ενός νέου τμήματος ιατρικής μικροβιολογίας - τη μελέτη των μορφών L βακτηρίων και μυκοπλασμάτων. Αυτή η κατεύθυνση ήταν μια λογική συνέχεια της μελέτης των μορφών φιλτραρίσματος, από την οποία ο V.D. Ο Τιμάκοφ ξεκίνησε την επιστημονική του δραστηριότητα. Για μια σειρά μελετών για την αποσαφήνιση του ρόλου των μορφών L των βακτηρίων και της οικογένειας μυκοπλασμάτων σε μολυσματικές ασθένειες, ο V.D. Ο Timakov μαζί με τον καθηγητή G.Ya. Ο Κάγκαν τιμήθηκε με το Βραβείο Λένιν το 1974.
Μία από τις κύριες κατευθύνσεις της επιστημονικής δραστηριότητας του V.D. Η Timakova είναι αφοσιωμένη στη γενετική των μικροοργανισμών. V.D. Ο Timakov θεώρησε απαραίτητη τη χρήση γενετικής ανάλυσης για την επίλυση σημαντικών ιατρικά μικροβιολογικών και επιδημιολογικών προβλημάτων. Και επί του παρόντος, η κατεύθυνση της εργασίας για τη γενετική των βακτηρίων είναι η κύρια στο Ινστιτούτο Επιδημιολογίας και Μικροβιολογίας που φέρει το όνομά του. Gamaleya. Δραστηριότητες του V.D. Οι προσπάθειες της Timakova να ανακατασκευάσει τη γενετική δεν περιορίζονταν στη διεξαγωγή της δικής της έρευνας. Έκανε ένα τεράστιο ποσό για να αναδημιουργήσει τη γενετική σε όλη τη χώρα μας.
Εκτός από το πάθος για τη δουλειά του, ο Βλαντιμίρ Ντμίτριεβιτς χαρακτηριζόταν από καθαρό μυαλό, κατανόηση της ζωής και θάρρος. Η τελευταία αυτή ιδιότητα αποδείχθηκε πλήρως στον αγώνα του ενάντια σε αντιεπιστημονικές «μεγάλες» ανακαλύψεις, όπως αυτές που υποστήριζαν ότι οι ιοί μπορούσαν να μετατραπούν σε βακτήρια.

Ο εξέχων Ρώσος μικροβιολόγος N.F.GAMALEYA (1859-1949), ο οποίος το 1886 εργάστηκε με τον Παστέρ για τη λύσσα, μαζί με τους Mechnikov και Bardakh ίδρυσαν τον πρώτο βακτηριολογικό σταθμό στη Ρωσία, όπου παρήχθη ένα αντιλυσσικό εμβόλιο και οι άνθρωποι εμβολιάστηκαν κατά της λύσσας. Ο N.F. Gamaleya είναι συγγραφέας πολλών επιστημονικών εργασιών αφιερωμένων στη λύσσα, τη χολέρα και άλλα προβλήματα μικροβιολογίας και ανοσολογίας.

Ο L.A. ZILBER (1894-1966) είναι ο ιδρυτής της ιογενούς θεωρίας της προέλευσης των όγκων, απομόνωσε τον αιτιολογικό παράγοντα της εγκεφαλίτιδας από κρότωνες της Άπω Ανατολής.

Οι πρόοδοι στη μελέτη των αντιγόνων όγκου εμπνέουν τον L.A. Zilber να επιχειρήσει αντινεοπλασματικό εμβολιασμό, τον οποίο ξεκίνησε γύρω στο 1950. μαζί με τους Z.L. Baidakova και R.M. Radzikhovskaya σε δύο μοντέλα: όγκο Brown-Pierce σε κουνέλια και αυθόρμητο καρκίνο του μαστού σε ποντίκια.

P.F. Ο ZDRODOVSKY (1890-1976) ασχολήθηκε με το πρόβλημα των ρικετσιοπαθειών, της ελονοσίας, της βρουκέλλωσης και της ρύθμισης της ανοσίας.

Η Zinaida Vissarionovna ERMOLYEVA είναι η δημιουργός του πρώτου εγχώριου αντιβιοτικού. Από όλα τα επιτεύγματα της επιστημονικής και τεχνολογικής προόδου, η ανακάλυψη των αντιβιοτικών, και κυρίως της πενικιλίνης, έχει αναμφίβολα τη μεγαλύτερη σημασία για τη διατήρηση της υγείας των ανθρώπων και την αύξηση του προσδόκιμου ζωής τους. Ανάμεσα στους εξέχοντες επιστήμονες της χώρας μας που έχουν συμβάλει σημαντικά στην ανάπτυξη αυτού του τομέα της ιατρικής, μια από τις κορυφαίες θέσεις ανήκει δικαιωματικά στον δημιουργό του πρώτου εγχώριου αντιβιοτικού, έναν εξαιρετικό μικροβιολόγο, έναν ταλαντούχο οργανωτή υγείας, ένα διάσημο κοινό. φιγούρα, μια υπέροχη δασκάλα, ακαδημαϊκός της Ακαδημίας Ιατρικών Επιστημών της ΕΣΣΔ, Επίτιμη Επιστήμονας της RSFSR, βραβευμένη με Κρατικό Βραβείο ΕΣΣΔ, Zinaida Vissarionovna Ermolyeva. Μαζί με άλλους επιστήμονες, στάθηκε στις απαρχές της ιατρικής βακτηριοχημείας και της μελέτης των αντιβιοτικών στη χώρα μας, ήταν ένα άτομο με μεγάλο οργανωτικό ταλέντο και ανεξάντλητη ενέργεια, της οποίας η ακούραστη δουλειά και οι εξαιρετικές προσωπικές της ιδιότητες της κέρδισαν τον παγκόσμιο σεβασμό και την αναγνώριση.

Ένας από τους σημαντικούς τομείς της επιστημονικής δραστηριότητας της Zinaida Vissarionovna είναι η μελέτη της χολέρας. Με βάση σε βάθος, ολοκληρωμένες μελέτες της μορφολογίας και της βιολογίας της χολέρας και των δονήσεων που μοιάζουν με χολέρα, ο Z. V. Ermolyeva πρότεινε μια νέα μέθοδο για τη διαφορική διάγνωση αυτών των μικροοργανισμών.

Το 1942, δημοσιεύτηκε η μονογραφία του Z.V. Ermolyeva "Cholera", η οποία συνόψισε τα αποτελέσματα σχεδόν 20 ετών μελέτης του Vibrio cholerae. Αυτή η μονογραφία παρείχε νέες μεθόδους εργαστηριακής διάγνωσης, θεραπείας και πρόληψης της χολέρας.
Η Zinaida Vissarionovna αφιέρωσε σημαντικό μέρος της επιστημονικής της δουλειάς στην απομόνωση και τη μελέτη ουσιών που έχουν αντιβακτηριδιακή δράση. Η πρώτη τέτοια ουσία, που ονομάζεται «λυσοζύμη», απομονώθηκε από τον Z. V. Ermolyeva μαζί με τον I. S. Buyanovskaya το 1929. Όπως έδειξαν τα αποτελέσματα περαιτέρω έρευνας, η λυσοζύμη βρίσκεται σε πολλούς ιστούς, ζωικής και φυτικής προέλευσης.

Το 1960, μια ομάδα επιστημόνων με επικεφαλής τον Z.V. Ermolyeva, για πρώτη φορά στη χώρα μας, έλαβε το αντιικό φάρμακο ιντερφερόνη. Αυτό το φάρμακο χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά για τη θεραπεία της σοβαρής γρίπης το 1962 και ως προφυλακτικό. Το φάρμακο χρησιμοποιείται επί του παρόντος για την πρόληψη της γρίπης και άλλων οξειών αναπνευστικών ιογενών λοιμώξεων, καθώς και για τη θεραπεία ορισμένων ιογενών ασθενειών στην πρακτική των ματιών και του δέρματος.

Η Zinaida Vissarionovna αφιέρωσε περισσότερα από 30 χρόνια της ζωής της (1942-1974) στη μελέτη των αντιβιοτικών.

Το όνομα της Z.V. Ermolyeva είναι άρρηκτα συνδεδεμένο με τη δημιουργία της πρώτης εγχώριας πενικιλίνης, την ανάπτυξη της επιστήμης των αντιβιοτικών και την ευρεία χρήση τους στη χώρα μας. Ο μεγάλος αριθμός των τραυματιών κατά την πρώτη περίοδο του Μεγάλου Πατριωτικού Πολέμου απαιτούσε εντατική ανάπτυξη και άμεση εισαγωγή στην ιατρική πρακτική άκρως αποτελεσματικών φαρμάκων για την καταπολέμηση της μόλυνσης του τραύματος. Ήταν εκείνη τη στιγμή (1942) που η Z.V. Ermolyeva και οι συνάδελφοί της στο All-Union Institute of Epidemiology and Microbiology βρήκαν έναν ενεργό παραγωγό πενικιλίνης και απομόνωσαν την πρώτη εγχώρια πενικιλίνη - krustosin. Ήδη το 1943, το εργαστήριο άρχισε να προετοιμάζει πενικιλίνη για κλινικές δοκιμές.

Αργότερα, υπό την ηγεσία του Z.V. Ermolyeva, δημιουργήθηκαν και εισήχθησαν στην παραγωγή πολλά νέα αντιβιοτικά και οι δοσολογικές τους μορφές, όπως εκμολίνη, εκμονοβοκιλλίνη, δικιλλίνη, στρεπτομυκίνη, τετρακυκλίνη. συνδυαστικά αντιβιοτικά σκευάσματα (dipasfen, ερικυκλίνη κ.λπ.). Πρέπει να τονιστεί ότι η Zinaida Vissarionovna συμμετείχε πάντα ενεργά στην οργάνωση της βιομηχανικής παραγωγής αντιβιοτικών στη χώρα μας.

Ο Γερμανός γιατρός και επιστήμονας Robert Koch (1843-1910) έλαβε το βραβείο Νόμπελ για το μικροβιολογικό του έργο κατά της φυματίωσης. Δημιούργησε επίσης πολλές θεμελιώδεις μεθόδους για μικροβιολογική έρευνα, μερικές από τις οποίες χρησιμοποιούνται ακόμα και σήμερα.

Δουλειά μιας ζωής

Στα τέλη του 19ου αιώνα, η φυματίωση σκότωσε σχεδόν το ένα τρίτο όλων των μεσήλικων ενηλίκων στην Ευρώπη. Οι γιατροί και οι επιστήμονες εκείνης της εποχής έκαναν πολλές προσπάθειες να βρουν μια θεραπεία. Ο Κοχ Ρόμπερτ δεν αποτελούσε εξαίρεση· ο αγώνας ενάντια σε αυτή τη σοβαρή ασθένεια έγινε η αποστολή του, το έργο ολόκληρης της ζωής του. Παρά την τεράστια πρόοδο στον εντοπισμό και την πιθανή θεραπεία αυτής της ασθένειας, ακόμη και με το βραβείο Νόμπελ Ιατρικής για αυτήν την εργασία, ο επιστήμονας δεν σταμάτησε ποτέ να βελτιώνει τις ερευνητικές μεθόδους που είχαν σημαντικό αντίκτυπο σε ολόκληρη τη μικροβιολογία.

Νεολαία και επιλογή επαγγέλματος

Οι γονείς του μελλοντικού επιστήμονα ήταν φτωχοί ανθρακωρύχοι που έμειναν έκπληκτοι με το τι τους είχε χαρίσει ένα ικανό αγόρι η μοίρα. Γεννημένος το 1843 στο Clausthal (Γερμανία), ο Heinrich Hermann Robert Koch ήταν ένα πραγματικό παιδί θαύμα ως παιδί. Σε ηλικία πέντε ετών διάβαζε ήδη εφημερίδες και λίγο αργότερα ενδιαφέρθηκε για την κλασική λογοτεχνία και ήταν ειδικός στο σκάκι. Το ενδιαφέρον μου για τις επιστήμες ξεκίνησε από το λύκειο, όπου επέλεξα τη βιολογία ως αγαπημένο μου μάθημα.

Το 1866, σε ηλικία 23 ετών, ο Heinrich Robert Koch έλαβε το πτυχίο του M.D και πέρασε την επόμενη δεκαετία εργαζόμενος ως γιατρός σε διάφορες νοσοκομειακές και κυβερνητικές επιστημονικές εταιρείες. Το 1876, δημοσίευσε τη σημαντική έρευνά του για τη νόσο του άνθρακα, η οποία του έφερε ευρεία φήμη. Λίγα χρόνια αργότερα διορίστηκε σύμβουλος στο υγειονομικό γραφείο, όπου πέρασε τον περισσότερο χρόνο του ασχολούμενος με προβλήματα που σχετίζονται με τη φυματίωση.

Προσδιορισμός της αιτίας της φυματίωσης

Η σύγχρονη ιατρική γνωρίζει πολλές αιτίες των περισσότερων ασθενειών. Στην εποχή που ζούσε ο Κοχ Ρόμπερτ, αυτή η γνώση δεν ήταν τόσο συνηθισμένη. Μία από τις πρώτες σημαντικές ανακαλύψεις του επιστήμονα ήταν η ταυτοποίηση του Mycobacterium tuberculosis, που προκαλεί αυτή τη θανατηφόρα ασθένεια. Ο Robert Koch, ενώ μελετούσε τα αίτια της μόλυνσης, μόλυνε σκόπιμα τα ινδικά χοιρίδια με υλικό από ένα από τα τρία μολυσμένα ζώα: πιθήκους, βοοειδή και ανθρώπους. Ως αποτέλεσμα, διαπιστώθηκε ότι τα βακτήρια των μολυσμένων χοίρων ήταν πανομοιότυπα με αυτά με τα οποία είχαν μολυνθεί, ανεξάρτητα από την πηγή μόλυνσης.

Τα αξιώματα του Κοχ

Τι συνεισφορά έκανε ο Robert Koch στη μικροβιολογία; Μία από τις μεθόδους με τη μεγαλύτερη επιρροή ήταν η πρόταση ότι ο αιτιολογικός παράγοντας μιας ασθένειας μπορούσε να αναγνωριστεί με υψηλό βαθμό εμπιστοσύνης εάν πληρούνταν τέσσερις προϋποθέσεις, οι οποίες αργότερα έγιναν γνωστές ως αξιώματα του Koch. Εδώ είναι:

1. Ο μικροοργανισμός πρέπει να προκαλεί ασθένειες σε όλους τους οργανισμούς στους οποίους υπάρχει σε αφθονία, επομένως δεν πρέπει να υπάρχουν σε μη μολυσμένους οργανισμούς.
2. Το ύποπτο μικρόβιο πρέπει να απομονωθεί και να αναπτυχθεί στην καθαρή του μορφή.
3. Η επανεισαγωγή του μικροβίου θα πρέπει να προκαλέσει ασθένεια σε προηγουμένως μη μολυσμένους οργανισμούς.
4. Το ύποπτο μικρόβιο πρέπει να απομονωθεί εκ νέου από τον υπό δοκιμή οργανισμό, να αναπτυχθεί σε καθαρή μορφή και να είναι πανομοιότυπο με το αρχικά απομονωμένο μικρόβιο.

Ιδρυτής της βακτηριολογίας και της μικροβιολογίας

Μεταξύ των ασθενειών που μελέτησε ο Γερμανός γιατρός Ρόμπερτ Κοχ (άνθρακας το 1876 και φυματίωση το 1882), υπήρχε και η χολέρα το 1883. Το 1905, ο επιστήμονας τιμήθηκε με το Νόμπελ Φυσιολογίας ή Ιατρικής. Ενώ ήταν ακόμη φοιτητής ιατρικής, ο Heinrich Hermann Robert Koch είχε μεγάλο ενδιαφέρον για την παθολογία και τις μολυσματικές ασθένειες. Ως γιατρός εργάστηκε σε πολλές μικρές πόλεις σε όλη τη Γερμανία και κατά τη διάρκεια του Γαλλοπρωσικού πολέμου (1870-1872) πήγε εθελοντικά στο μέτωπο ως στρατιωτικός χειρουργός.

Αργότερα διορίστηκε ως τοπικός ιατρός, του οποίου η κύρια ευθύνη ήταν η μελέτη της εξάπλωσης μολυσματικών βακτηριακών ασθενειών. Η εφαρμογή της βιοτεχνολογίας στην ιατρική εξακολουθεί να βασίζεται σε μεγάλο βαθμό στις αρχές του Koch για την τεκμηρίωση των αιτιών των μολυσματικών ασθενειών. Ο μεγάλος επιστήμονας πέθανε το 1910 στην περιοχή του Μέλανα Δρυμού (Γερμανία), ήταν 66 ετών.

Έρευνα για τον άνθρακα

Την εποχή που ζούσε ο Ρόμπερτ Κοχ, ο άνθρακας ήταν ευρέως διαδεδομένος στα ζώα φάρμας στην περιοχή του Wöllstein. Ο επιστήμονας δεν διέθετε κανένα επιστημονικό εξοπλισμό εκείνη τη στιγμή, οι βιβλιοθήκες και οι επαφές με άλλους επιστήμονες ήταν απρόσιτες. Ωστόσο, αυτό δεν τον εμπόδισε και άρχισε να μελετά αυτήν την ασθένεια. Το εργαστήριό του ήταν ένα διαμέρισμα 4 δωματίων, που ήταν το σπίτι του, και ο κύριος εξοπλισμός του ήταν ένα μικροσκόπιο, δώρο της γυναίκας του.

Οι βάκιλοι Pollender, Rayer και Davaine είχαν ανακαλυφθεί προηγουμένως ως οι αιτιολογικοί παράγοντες του άνθρακα και ο Koch ξεκίνησε να αποδείξει επιστημονικά ότι αυτός ο βάκιλος ήταν στην πραγματικότητα η αιτία της νόσου. Εμβολίασε ποντίκια χρησιμοποιώντας σπιτικά ροκανίδια με βάκιλλους άνθρακα που είχαν ληφθεί από σπλήνες ζώων φάρμας που είχαν πεθάνει από την ασθένεια. Ανακαλύφθηκε ότι ο θάνατος των τρωκτικών επήλθε ακριβώς ως αποτέλεσμα της μόλυνσης που εισήλθε στο αίμα των ζώων. Το γεγονός αυτό επιβεβαίωσε τα ευρήματα άλλων επιστημόνων που υποστήριξαν ότι η ασθένεια θα μπορούσε να μεταδοθεί μέσω του αίματος ζώων που πάσχουν από άνθρακα.

Οι βάκιλοι του άνθρακα είναι ανθεκτικοί στο εξωτερικό περιβάλλον

Αυτό όμως δεν ικανοποίησε τον Κοχ. Ήθελε επίσης να μάθει εάν αυτά τα μικρόβια θα μπορούσαν να προκαλέσουν ασθένειες εάν δεν είχαν έρθει ποτέ σε επαφή με οποιοδήποτε είδος ζωικού οργανισμού. Για να λύσει αυτό το πρόβλημα, έλαβε καθαρές καλλιέργειες βακίλλων. Ο Robert Koch, μελετώντας και φωτογραφίζοντας τους, κατέληξε στο συμπέρασμα ότι κάτω από δυσμενείς συνθήκες παράγουν σπόρια που αντέχουν στην έλλειψη οξυγόνου και άλλους αρνητικούς για τα βακτήρια παράγοντες. Έτσι, μπορούν να επιβιώσουν στο εξωτερικό περιβάλλον για αρκετό καιρό και όταν δημιουργηθούν οι κατάλληλες συνθήκες, αποκαθίσταται η ζωτικότητά τους, βγαίνουν βάκιλοι από τα σπόρια, ικανοί να μολύνουν τους ζωντανούς οργανισμούς στους οποίους εισέρχονται, παρά το γεγονός ότι είχαν προηγουμένως καμία επαφή μαζί τους.

Robert Koch: ανακαλύψεις και επιτεύγματα

Τα αποτελέσματα της επίπονης εργασίας του για τον άνθρακα επιδείχθηκαν από τον Koch στον Ferdinand Cohn, καθηγητή βοτανικής στο Πανεπιστήμιο του Breslau, ο οποίος συγκέντρωσε τους συναδέλφους του για να παρακολουθήσουν την ανακάλυψη. Μεταξύ των παρευρισκομένων ήταν και ο καθηγητής Ανατομικής Παθολογίας Konheim. Όλοι εντυπωσιάστηκαν βαθιά από το έργο του Koch και μετά τη δημοσίευση μιας εργασίας σχετικά με το θέμα σε ένα βοτανικό περιοδικό το 1876, ο Koch έγινε αμέσως διάσημος. Συνέχισε, ωστόσο, να εργάζεται για τον Wöllstein για άλλα τέσσερα χρόνια και κατά τη διάρκεια αυτής της χρονικής περιόδου βελτίωσε τις μεθόδους καταγραφής, χρώσης και φωτογράφισης βακτηρίων.

Η ζωή στο Βερολίνο

Αργότερα, ήδη στο Βερολίνο, συνέχισε να βελτιώνει βακτηριολογικές μεθόδους, καθώς και να εφευρίσκει νέες - την ανάπτυξη καθαρών βακτηρίων σε στερεά μέσα, όπως οι πατάτες. Ο τομέας στον οποίο συνέχισε να εργάζεται ο Ρόμπερτ Κοχ, η μικροβιολογία, παρέμενε η στενή του ειδικότητα μέχρι πρόσφατα. Ανέπτυξε επίσης νέες μεθόδους χρώσης βακτηρίων που τα έκαναν πιο ορατά και βοήθησαν στην αναγνώρισή τους. Το αποτέλεσμα όλης αυτής της εργασίας ήταν η εισαγωγή μεθόδων με τις οποίες τα παθογόνα βακτήρια μπορούν να ληφθούν απλά και εύκολα σε καθαρή καλλιέργεια, απαλλαγμένα από άλλους οργανισμούς, και με τις οποίες μπορούν να ανιχνευθούν και να ταυτοποιηθούν. Δύο χρόνια μετά την άφιξή του στο Βερολίνο, ο Koch ανακάλυψε τον βάκιλο της φυματίωσης, καθώς και μια μέθοδο για την ανάπτυξή του στην καθαρή του μορφή.

Καταπολέμηση της χολέρας

Ο Κοχ ήταν ακόμα απασχολημένος με την εργασία κατά της φυματίωσης όταν, το 1883, στάλθηκε στην Αίγυπτο ως επικεφαλής μιας γερμανικής επιτροπής για να ερευνήσει ένα ξέσπασμα χολέρας στη χώρα αυτή. Εδώ ανακάλυψε το Vibrio, που προκαλεί την ασθένεια, και έφερε αγνούς πολιτισμούς στη Γερμανία. Με παρόμοιο θέμα ασχολήθηκε και στην Ινδία. Με βάση τις γνώσεις του για τη βιολογία και τον τρόπο εξάπλωσης του Vibrio cholerae, οι επιστήμονες διατύπωσαν κανόνες για την καταπολέμηση της επιδημίας, οι οποίοι εγκρίθηκαν από τις Μεγάλες Δυνάμεις στη Δρέσδη το 1893 και αποτέλεσαν τη βάση μεθόδων ελέγχου που χρησιμοποιούνται μέχρι σήμερα.

Διορισμός σε υψηλές θέσεις

Το 1885, ο Robert Koch, του οποίου η βιογραφία προέρχεται από μια μικρή πόλη και μια φτωχή οικογένεια, διορίστηκε καθηγητής υγιεινής στο Πανεπιστήμιο του Βερολίνου. Το 1890 διορίστηκε γενικός χειρουργός και το 1891 έγινε ομότιμος καθηγητής της Ιατρικής Σχολής και διευθυντής του νέου Ινστιτούτου Λοιμωδών Νοσημάτων. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, ο Koch επέστρεψε στη δουλειά του για την καταπολέμηση της φυματίωσης. Προσπάθησε να σταματήσει την ασθένεια με ένα φάρμακο που ονόμασε tuberculin, που δημιουργήθηκε από μυκοβακτήρια. Δημιουργήθηκαν δύο εκδοχές του φαρμάκου. Το πρώτο από τα οποία προκάλεσε αμέσως σημαντική διαμάχη. Δυστυχώς, η θεραπευτική δύναμη αυτού του φαρμάκου ήταν πολύ υπερβολική και οι ελπίδες που είχαν τεθεί σε αυτό δεν δικαιώθηκαν. Η νέα φυματίνη (δεύτερη έκδοση) ανακοινώθηκε από τον Koch το 1896 και η φαρμακευτική της αξία ήταν επίσης απογοητευτική, αλλά παρόλα αυτά οδήγησε στην ανακάλυψη ουσιών με διαγνωστική αξία.

Και μετά πανούκλα, ελονοσία, τρυπανοσωμίαση...

Το 1896, ο Koch ταξίδεψε στη Νότια Αφρική για να μελετήσει την προέλευση της πανώλης. Παρά το γεγονός ότι η αιτία αυτής της ασθένειας δεν ήταν δυνατό να εντοπιστεί, το ξέσπασμα εξακολουθούσε να περιορίζεται. Ακολούθησαν εργασίες στην Ινδία και την Αφρική για την ελονοσία, τον πυρετό Blackwater, την τρυπανοσωμίαση και την πανώλη των βοοειδών. Η δημοσίευση των παρατηρήσεών του για αυτές τις ασθένειες έγινε το 1898. Λίγο μετά την επιστροφή του στη Γερμανία, τα ταξίδια του σε όλο τον κόσμο συνεχίστηκαν. Αυτή τη φορά ήταν η Ιταλία, όπου επιβεβαίωσε το έργο του Sir Ronald Ross για την ελονοσία και πραγματοποίησε χρήσιμη εργασία σχετικά με την αιτιολογία των διαφόρων μορφών ελονοσίας και τον έλεγχο τους με κινίνη.

Συμβολή στη μικροβιολογία: τιμητικά βραβεία και μετάλλια

Αυτά τα τελευταία χρόνια της ζωής του ήταν που ο Koch κατέληξε στο συμπέρασμα ότι οι βάκιλλοι που προκαλούν φυματίωση σε ανθρώπους και βοοειδή δεν είναι πανομοιότυποι. Η δήλωσή του στο Διεθνές Ιατρικό Συνέδριο κατά της Φυματίωσης στο Λονδίνο το 1901 προκάλεσε πολλές διαμάχες, αλλά είναι πλέον γνωστό ότι η άποψη του Κοχ ήταν σωστή. Η εργασία του για τον τύφο οδήγησε στην ιδέα ότι η ασθένεια μεταδιδόταν πολύ πιο συχνά από άτομο σε άτομο παρά από το πόσιμο νερό, και αυτό οδήγησε σε νέα μέτρα ελέγχου.

Τον Δεκέμβριο του 1904, ο Koch στάλθηκε στην Ανατολική Αφρική για να μελετήσει τον πυρετό των βοοειδών, όπου έκανε σημαντικές παρατηρήσεις όχι μόνο για την ασθένεια, αλλά και για τα παθογόνα είδη Babesia και Trypanosoma και τη σπειροχαίτωση από κρότωνες. Στον καθηγητή Robert Koch απονεμήθηκαν πολλά βραβεία και μετάλλια, τιμητική συμμετοχή σε επιστημονικές εταιρείες και ακαδημίες του Βερολίνου, της Βιέννης, της Νάπολης, της Νέας Υόρκης και άλλων. Τιμήθηκε με το Γερμανικό Τάγμα του Στέμματος, τον Μεγαλόσταυρο του Γερμανικού Τάγματος του Ερυθρού Αετού. Σε πολλές χώρες, μνημεία και μνημεία ανεγέρθηκαν προς τιμήν του μεγάλου μικροβιολόγου. Ο Δρ Κοχ πέθανε στις 27 Μαΐου 1910 στο Μπάντεν-Μπάντεν.

Η Γερμανία έχει δημιουργήσει πολλά καινοτόμα επιστημονικά μυαλά ανά τους αιώνες, με έναν από τους μεγαλύτερους επιστήμονες της εποχής του να είναι ο Robert Heinrich Hermann Koch, ο οποίος έθεσε τα θεμέλια για τη μελέτη της βακτηριολογίας και βοήθησε να εξηγηθούν τα αίτια και οι πιθανές θεραπείες για διάφορες βακτηριακές ασθένειες.

Ήταν ένας ατρόμητος ερευνητής καθώς ήταν υπεύθυνος για τη διεξαγωγή πρωτοφανών προσπαθειών για τη μελέτη απειλητικών για τη ζωή ασθενειών όπως ο άνθρακας, η φυματίωση και πολλές άλλες. Αυτός ο σοφός επιστήμονας έπαιξε σημαντικό ρόλο και στη δημιουργία σύγχρονων εργαστηρίων. Ο Ρόμπερτ Κοχ δεν ήταν απλώς ένας ταλαντούχος επιστήμονας, ήταν μια ιδιοφυΐα και ο αριθμός των βραβείων και των μεταλλίων που έλαβε σε όλη του τη ζωή αποτελεί την καλύτερη απόδειξη της συμβολής του στην παγκόσμια ιατρική επιστήμη.

Ειδικά περιβάλλοντα.

Στη βακτηριολογία, χρησιμοποιούνται ευρέως βιομηχανικά παραγόμενα ξηρά θρεπτικά μέσα, τα οποία είναι υγροσκοπικές σκόνες που περιέχουν όλα τα συστατικά του μέσου εκτός από το νερό. Για την παρασκευή τους χρησιμοποιούνται τρυπτικά χωνεύματα φθηνών μη εδώδιμων προϊόντων (απορρίμματα ψαριών, κρεατοστεάλευρα, τεχνική καζεΐνη). Είναι βολικά για τη μεταφορά, μπορούν να αποθηκευτούν για μεγάλο χρονικό διάστημα, απαλλάσσουν τα εργαστήρια από την τεράστια διαδικασία προετοιμασίας των μέσων και τα φέρνουν πιο κοντά στην επίλυση του ζητήματος της τυποποίησης των μέσων. Η ιατρική βιομηχανία παράγει ξηρά μέσα Endo, Levin, Ploskirev, θειώδες βισμούθιο άγαρ, θρεπτικό άγαρ, υδατάνθρακες με δείκτη BP και άλλα.

Θερμοστάτες

Οι θερμοστάτες χρησιμοποιούνται για την καλλιέργεια μικροοργανισμών.

Ο θερμοστάτης είναι μια συσκευή που διατηρεί σταθερή θερμοκρασία. Η συσκευή αποτελείται από θερμάστρα, θάλαμο, διπλά τοιχώματα, μεταξύ των οποίων κυκλοφορεί αέρας ή νερό. Η θερμοκρασία ρυθμίζεται από θερμοστάτη. Η βέλτιστη θερμοκρασία για την αναπαραγωγή των περισσότερων μικροοργανισμών είναι 37°C.

ΜΑΘΗΜΑ 7

ΘΕΜΑ: ΜΕΘΟΔΟΙ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗΣ ΑΓΝΗΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΑΕΡΟΒΙΩΝ. ΒΗΜΑΤΑ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗΣ ΚΑΘΑΡΗΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΑΕΡΟΒΙΚΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ ΜΕ ΤΗ ΜΕΘΟΔΟ ΜΗΧΑΝΙΚΗΣ ΔΙΑΚΟΠΗΣ

Πλάνο μαθήματος

1. Η έννοια της «καθαρής καλλιέργειας» βακτηρίων

2. Μέθοδοι απομόνωσης καθαρών καλλιεργειών με μηχανικό διαχωρισμό

3. Βιολογικές μέθοδοι απομόνωσης καθαρών καλλιεργειών

4. Μέθοδοι αναγνώρισης βακτηρίων

Σκοπός του μαθήματος:Να εξοικειώσει τους μαθητές με διάφορες μεθόδους απομόνωσης καθαρών καλλιεργειών, να διδάξει πώς να σπείρουν με βρόχο, εγκεφαλικά επεισόδια και ένεση

Οδηγίες για την επίδειξη

Στο φυσικό τους περιβάλλον, τα βακτήρια βρίσκονται σε ενώσεις. Προκειμένου να προσδιοριστούν οι ιδιότητες των μικροβίων και ο ρόλος τους στην ανάπτυξη της παθολογικής διαδικασίας, είναι απαραίτητο να υπάρχουν βακτήρια με τη μορφή ομοιογενών πληθυσμών (καθαρές καλλιέργειες). Μια καθαρή καλλιέργεια είναι μια συλλογή βακτηριακών ατόμων του ίδιου είδους που αναπτύσσονται σε ένα θρεπτικό μέσο.

Μέθοδοι απομόνωσης καθαρών καλλιεργειών αερόβιων βακτηρίων

Μέθοδος Παστέρ Μέθοδος Koch Βιολογική Φυσική

(έχει ιστορικό (καλωδίωση πλάκας)

Εννοια)

Χημική Μέθοδος

Στσούκεβιτς

Μοντέρνο

Σπορά με θηλιά Σπορά με σπάτουλα

(μέθοδος Drigalski)

Μέθοδοι για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών:

1. Οι μέθοδοι μηχανικού διαχωρισμού βασίζονται στον διαχωρισμό των μικροβίων με διαδοχικό τρίψιμο του υλικού δοκιμής πάνω από την επιφάνεια του άγαρ.

α) Μέθοδος Παστέρ - έχει ιστορική σημασία, προβλέπει τη διαδοχική αραίωση του υλικού δοκιμής σε υγρό θρεπτικό μέσο με τη μέθοδο έλασης

β) Η μέθοδος του Koch - η μέθοδος πλακών - βασίζεται στη διαδοχική αραίωση του υλικού δοκιμής με άγαρ πεπτόνης κρέατος, που ακολουθείται από έκχυση δοκιμαστικών σωλήνων με το αραιωμένο υλικό σε τρυβλία Petri.

γ) Μέθοδος Drigalsky - όταν σπέρνετε υλικό με πλούσια σπορά με μικροχλωρίδα, χρησιμοποιήστε 2-3 φλιτζάνια για διαδοχική σπορά με σπάτουλα.

δ) Σπορά με θηλιά σε παράλληλες κινήσεις.

2. Οι βιολογικές μέθοδοι βασίζονται στις βιολογικές ιδιότητες των παθογόνων.

α) Βιολογική - μόλυνση πολύ ευαίσθητων ζώων, όπου τα μικρόβια πολλαπλασιάζονται και συσσωρεύονται γρήγορα. Σε ορισμένες περιπτώσεις, αυτή η μέθοδος είναι η μόνη που επιτρέπει την απομόνωση μιας καλλιέργειας του παθογόνου από ένα άρρωστο άτομο (για παράδειγμα, με τουλαραιμία), σε άλλες περιπτώσεις είναι πιο ευαίσθητη (για παράδειγμα, απομόνωση πνευμονιόκοκκου σε λευκά ποντίκια ή του παθογόνου φυματίωση σε ινδικά χοιρίδια).

β) Χημική – με βάση την αντίσταση στα οξέα των μυκοβακτηρίων. Για να απαλλαγεί το υλικό από τη συνοδευτική χλωρίδα, αυτό
επεξεργάζεται με διάλυμα οξέος. Μόνο οι βάκιλοι της φυματίωσης θα αναπτυχθούν, αφού τα ανθεκτικά στα οξέα μικρόβια πέθαναν υπό την επίδραση του οξέος.

γ) Η φυσική μέθοδος βασίζεται στην αντίσταση των σπορίων στη θερμότητα. Για να απομονωθεί μια καλλιέργεια βακτηρίων που σχηματίζουν σπόρους από
μίγματα, το υλικό θερμαίνεται στους 80°C και ενοφθαλμίζεται σε θρεπτικό μέσο. Μόνο τα βακτήρια των σπορίων θα αναπτυχθούν, αφού τα σπόρια τους παρέμειναν ζωντανά και προκάλεσαν την ανάπτυξη.

δ) Η μέθοδος του Shchukevich - βασίζεται στην υψηλή κινητικότητα του Proteus vulgaris, ικανό να παράγει έρπουσα ανάπτυξη.

Μέθοδος παρασκευής πλακών άγαρ

Το MPA τήκεται σε λουτρό νερού και μετά ψύχεται στους 50-55°C. Ο λαιμός του μπουκαλιού καίγεται στη φλόγα μιας λάμπας οινοπνεύματος, τα πιάτα Petri ανοίγουν έτσι ώστε ο λαιμός του μπουκαλιού να χωράει χωρίς να αγγίζει τις άκρες του πιάτου, χύνονται 10-15 ml MPA, το καπάκι είναι κλειστό, το σκεύος ανακινείται έτσι ώστε το μέσο να κατανεμηθεί ομοιόμορφα και αφήνεται σε οριζόντια επιφάνεια μέχρι να σκληρύνει. Μετά την ξήρανση, οι πλάκες άγαρ πλάκας αποθηκεύονται στο κρύο.

Σπορά βρόχου

Χρησιμοποιώντας έναν αποστειρωμένο κρύο βρόχο, πάρτε μια σταγόνα υλικού, ανοίξτε τη μια άκρη του κυπέλλου με το αριστερό σας χέρι, φέρτε τη θηλιά μέσα και κάντε μερικές πινελιές σε ένα σημείο με μια θηλιά στην απέναντι άκρη, στη συνέχεια κόψτε τη θηλιά και εμβολιάστε το υλικό σε παράλληλες διαδρομές από τη μια άκρη του κυπέλλου στην άλλη με ένα διάστημα 5-6 mm. Στην αρχή της σποράς, όταν υπάρχουν πολλά μικρόβια στον βρόχο, θα δώσουν συρρέουσα ανάπτυξη, αλλά με κάθε χτύπημα υπάρχουν όλο και λιγότερα μικρόβια στον βρόχο και θα παραμείνουν μεμονωμένα και θα παράγουν απομονωμένες αποικίες.

Σπορά σύμφωνα με τη μέθοδο Drigalsky

Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται κατά τον εμβολιασμό υλικού πολύ μολυσμένου με μικροχλωρίδα (πύον, κόπρανα, πτύελα). Για να σπείρετε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Drigalsky, πάρτε μια σπάτουλα και πολλά φλιτζάνια (3-4). Η σπάτουλα είναι ένα εργαλείο κατασκευασμένο από μεταλλικό σύρμα ή γυάλινο βέλος, λυγισμένο σε τρίγωνο ή σχήμα L. Το υλικό εισάγεται στο πρώτο κύπελλο με μια θηλιά ή μια πιπέτα και κατανέμεται ομοιόμορφα με μια σπάτουλα στην επιφάνεια του μέσου· με την ίδια σπάτουλα, χωρίς να καεί, το υλικό τρίβεται στο θρεπτικό μέσο στο δεύτερο κύπελλο και στη συνέχεια στο τρίτο. Με τέτοια σπορά, το πρώτο κύπελλο θα έχει συρρέουσα ανάπτυξη και μεμονωμένες αποικίες θα αναπτυχθούν στα επόμενα κύπελλα.